[发明专利]一种酚类化合物对硝化细菌电子传递体系影响的检测方法

摘要

本发明涉及酚类化合物对硝化细菌电子传递体系影响的检测方法。从SBR反应器中取出污泥加入到锥形瓶中，投加酚类化合物后将其放入恒温水浴振荡器中振荡。混合后各取污泥于离心管中，加入Tris～HCl缓冲液、亚硫酸钠溶液和TTC溶液，放入恒温水浴振荡器中振荡培养，然后加入甲醛溶液终止反应，离心后用滴管吸尽上清液后加入萃取剂，待充分萃取后取出使用紫外可见光分光光度计在485nm波长下测定吸光度(D485)，计算TTC‑ETS值并用Logistic方程拟合抑制剂浓度与对应TTC‑ETS值，得出EC50(半数效应浓度)。本方法反映酚类化合物对污泥电子传递体系的抑制作用，通过计算酚类化合物对污泥的半数效应浓度，更加科学地分析其抑制效应。有效保护水土资源，控制环境污染，具有重大的环境、经济和社会效益。

主权项

一种酚类化合物对硝化细菌电子传递体系影响的检测方法，具体步骤如下：(1)在SBR装置中进行硝化细菌的富集培养，培养期间控制反应器内的温度在(28.0±0.5)℃，溶解氧质量浓度4～5mg/L，pH在7.5‑8.5，培养20～30天后，污泥浓度控制在2500～3000mg/L；然后静置浓缩；(2)取适量富集培养硝化细菌的污泥于锥形瓶中，向其投加不同质量的酚类化合物，控制酚类化合物质量浓度为0～100mg/l，根据不同酚类化合物设定不同的浓度梯度；(3)取洁净的培养皿烘干至恒重，记录质量W1；从锥形瓶取适量V0污泥于培养皿再烘干至恒重，记录质量W2，计算每毫升污泥干重为a(mg/ml)a=W2-W1V0;]]>(4)再重新从各锥形瓶中取等体积污泥V1ml于10mL离心管中，向离心管中加入Tris‑HCl缓冲液、亚硫酸钠溶液和TTC溶液；(5)将制备完成的样品放在(37±1)℃的恒温水浴振荡器中，避光暗处振荡培养25min～35min；(6)当达到培养时间时，向离心管中加入甲醛溶液终止反应，然后将样品放入离心机离心；(7)离心后，用滴管吸尽上清液；(8)向各离心管中加入无水乙醇做萃取剂，混合振荡均匀，在(37±1)℃下恒温水浴振荡器中充分萃取；(9)待充分萃取后，用0.45μm滤膜过滤样品，使用紫外可见光分光光度计在485nm波长下测定滤液的吸光度(D485)；(10)取TTC的还原产物TF溶于无水乙醇中，设定0～20ug/ml的系列标准溶液，使用紫外—可见光分光光度计波长在485nm处测量TF系列标准溶液吸光度，将TF质量浓度(ug/ml)和吸光度(D485)进行线性回归分析，得到TF标准曲线及其斜率K；(11)酚类化合物不同浓度下，硝化细菌电子传递体系活性的计算公式如下：式中，ETSt：污泥电子传递体系活性,μg/(mg·h)；V：萃取剂体积，ml；D485：485nm波长下滤液的吸光度；K：TF溶液标准曲线斜率；a·V1：总污泥干重，mg；T：培养时间，h；(12)根据系列ETSt值用Logistic方程(2式)拟合计算苯二酚类的半数效应浓度(EC50)来定量表征其对硝化污泥的毒性，实验数据用origin软件进行处理。ETSt=A1+(xx0)b---(2)]]>ETSt：污泥电子传递体系活性,μg/(mg·h)；A：常数，其含义为未加有毒物质时的空白对照组的TF的值，实验所得；x：苯二酚的质量浓度，mg/L；x0：EC50值,mg/L；b：经验系数，为常数，方程拟合所得。