[发明专利]一种小球藻原生质体制备方法在审
| 申请号： | 201711007925.9 | 申请日： | 2017-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN109706081A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | 王昭凯;胡凡;吴丽娟;林祥志 | 申请（专利权）人： | 国家海洋局第三海洋研究所 |
| 主分类号： | C12N1/12 | 分类号： | C12N1/12;C12R1/89 |
| 代理公司： | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人： | 张松亭;游学明 |
| 地址： | 361000 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明提供一种用于转基因小球藻原生质体的制备方法，包括如下步骤：(1)将小球藻细胞接种至活化培养基培养至对数生长期获得种子液后将种子液扩大培养，收集小球藻细胞；(2)利用200mM EDTA和250mM DTT预处理小球藻细胞；(3)将预处理后的小球藻细胞利用复合酶(2％纤维素酶、2％果胶酶和2％蜗牛酶)在30℃，pH 5.8，120rpm，酶解14h的条件下处理，可得到原生质体，原生质体底滤为49.17％。本发明利用化学试剂及复合酶处理小球藻，能够得到高转化效率的原生质体用于转基因小球藻的构建。 | ||
| 搜索关键词： | 小球藻细胞 原生质体 预处理 转基因小球藻 小球藻 种子液 对数生长期 复合酶处理 活化培养基 原生质体制 化学试剂 扩大培养 纤维素酶 转化效率 复合酶 果胶酶 蜗牛酶 构建 酶解 制备 接种 | ||
【主权项】：
1.一种小球藻原生质体制备方法，包括如下步骤：1)预处理：利用EDTA、DTT混合溶液处理小球藻细胞，其中，EDTA浓度为150‑250mM，DTT浓度200‑300mM；处理条件为25‑30℃，25‑35min，50‑150rpm；2)预处理的细胞去除预处理液，然后采用纤维素酶、果胶酶和蜗牛酶混合酶处理小球藻细胞，即得到高转化率的小球藻原生质体，其中，纤维素酶、果胶酶和蜗牛酶的浓度均为1‑3％；预处理的条件为25‑35℃，pH 5‑6，10‑1500rpm，酶解时间为12‑16h。
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