[发明专利]一种羰基还原酶基因工程菌固定化细胞及其应用

摘要

本发明提供了一种利用固定化大肠杆菌(E.coli)工程菌细胞催化合成他汀类药物手性中间体(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯与(3R,5R)‑6‑氰基‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯的方法。包括含羰基还原酶大肠杆菌工程菌的培养、固定化细胞的制备、固定化细胞催化新型药物手性中间体(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯与(3R,5R)‑6‑氰基‑3,5‑二羟基己酸叔丁的合成。本发明方法采用固定化生物大肠杆菌工程菌细胞为催化剂，稳定性好，使用寿命长，有机溶剂耐受性好，可多次重复利用，并且无需昂贵的外源辅酶添加，可在有机相反应体系中催化他汀药物中间体的合成，产品产率与纯度高，并可大幅度降低生产成本，简化工艺步骤，减少“三废”排放，在他汀类药物手性中间体的工业化生产中具有极高应用价值。

主权项

一种羰基还原酶基因工程菌固定化细胞，其特征在于所述固定化细胞按如下方法制备：将羰基还原酶基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体用pH 7.0、100mM磷酸盐缓冲液悬浮，获得菌悬液；向菌悬液中加入活性炭，在20‑30℃，500rpm条件下水浴搅拌30min；再加入质量浓度5％聚乙烯亚胺水溶液，在20‑30℃，500rpm条件下水浴搅拌交联1h；然后加入质量浓度50％戊二醛水溶液，在20‑30℃，500rpm条件下水浴搅拌交联1h，抽滤，滤饼用pH 7.0、100mM磷酸盐缓冲液清洗两次，抽滤去除缓冲液，即获得羰基还原酶基因工程菌固定化细胞；所述菌悬液中湿菌体含量为100g/L；所述活性炭加入量以菌悬液体积计为6‑24g/L；所述聚乙烯亚胺水溶液体积用量以菌悬液体积计为1‑5％；所述戊二醛水溶液体积用量以菌悬液体积计为1‑5％。