[发明专利]一种产FAD依赖的葡萄糖脱氢酶的重组毕赤酵母及其构建方法和应用

摘要

本发明提供了一种产FAD依赖的葡萄糖脱氢酶的重组毕赤酵母及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明提供了包含FAD依赖的葡萄糖脱氢酶基因的重组质粒pMD‑GDH，FAD依赖的葡萄糖脱氢酶基因经密码子偏好性调整后在序列两端添加EcoRI限制酶切位点和NotI限制酶切位点，且在3’端加上六个组氨酸标签。所述重组毕赤酵母菌是以巴斯德毕赤酵母菌为表达宿主，包括所述重组质粒。产FAD依赖的葡萄糖脱氢酶的重组毕赤酵母在发酵生产FAD依赖的葡萄糖脱氢酶中的应用。实施例表明，采用所述重组毕赤酵母菌在10L发酵罐培养时经过136h诱导培养，酶活达到257600U/L，是现有技术中报道的酶活的5.3倍。

主权项

一种包含FAD依赖的葡萄糖脱氢酶基因的重组质粒pMD‑GDH，其特征在于，在质粒pMD的EcoRI和NotI限制性酶切位点处连接有FAD依赖的葡萄糖脱氢酶基因；所述FAD依赖的葡萄糖脱氢酶基因具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。