[发明专利]一种用于水禽的多联卵黄抗体制备方法

摘要

本发明提供了一种用于水禽的多联卵黄抗体制备方法，该技术方案针对在水禽中常见、且发病日龄较小的几种疾病筛选了六种病毒性抗原，覆盖了禽类呼肠孤病毒、细小病毒、小鹅瘟病毒、鸭肝炎病毒等多种病原。在此基础上，从疫苗制备、免疫方法等角度进行了针对性设计，有效保证了高免蛋中各抗体的效价水平，为卵黄抗体的临床保护效果奠定了基础。与此同时，本发明对后续纯化工艺进行了改进，利用特定截留分子量的中空纤维柱进行过滤浓缩，能在提升抗体纯度的基础上去除绝大部分大分子杂质，降低了产品的不良反应发生率。

主权项

1.一种用于水禽的多联卵黄抗体制备方法，其特征在于包括以下步骤：/n1)分别制备灭活的新型番鸭源鸭呼肠孤病毒、新型肉鸭源鸭呼肠孤病毒、番鸭源细小病毒、小鹅瘟病毒、Ⅰ型鸭肝炎病毒病、Ⅲ型鸭肝炎病毒毒液，六者等体积混合，得到混合抗原溶液；/n2)取由美国埃索公司出品的、型号为MARCOL52的白油，熬制，在熬制的过程中向其中加入所述白油质量4份的司班和所述白油质量2份的硬脂酸铝，得到疫苗佐剂；/n3)将步骤1)所得的混合抗原溶液与步骤2)所得的疫苗佐剂以(1～1.5):(1～2)(v/v)的比例混合均匀，即得到多联疫苗；/n4)利用步骤3)所得的多联疫苗免疫蛋鸡，产蛋前1个月免疫1次，两周后二免，二免两周后三免疫，收集三免后蛋鸡的鸡蛋，即为高免蛋；/n5)取步骤4)所得高免蛋，分离得到卵黄，搅拌得到卵黄匀浆；/n6)向步骤5)所得卵黄匀浆中加入其2倍体积的醋酸缓冲液，调pH至4.6～4.8；在15～20℃、搅拌条件下逐滴加入辛酸，至其中正辛酸终浓度为1％(v/v)，4～8℃条件下静置6～8h，然后以4000～6000r/min的转速离心30min，弃沉淀；上清液经中空纤维柱过滤浓缩后，加入浓缩产物1/10体积的、浓度为0.01mol/l无菌PBS缓冲液，调pH至7.2；向其中加入浓度为1％(v/v)的柳硫汞溶液，至其中柳硫汞终浓度为0.01％(v/v)，搅拌均匀；/n7)以30mg/mL的用量向步骤6)所得产物中加入β-葡聚糖干粉，加入冻干保护剂，分装冻干，即得到所述用于水禽的多联卵黄抗体。/n