[发明专利]一种从肿瘤细胞上清液中分离外泌体的方法

摘要

本发明公开了一种从肿瘤细胞上清液中分离外泌体的方法，包括如下步骤：当肿瘤细胞生长汇合率达85％‑95％时，收集培养基，获取细胞培养上清液，进行膜过滤后，收集滤液再将滤液超滤离心，收集离心超滤液，按超滤液体积1∶1比例加入10w/v％‑12w/v％聚乙‑醇溶液，并充分混匀后4℃离心，最后所得沉淀即为外泌体。本发明取材方便，易于富集扩增培养；分离过程中采用膜过滤、超滤离心和加入聚乙二醇溶液等手段有效增加外泌体富集，耗时短，成本低。

主权项

一种从肿瘤细胞上清液中分离外泌体的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：用完全培养基培养肿瘤细胞，当细胞生长密度达到50％‑90％时，换用无外泌体血清的培养基，培养24h‑48h后，收集细胞上清液，0℃‑4℃条件下，依次500‑1000×g和1500‑2500×g各离心15min以去除细胞或细胞碎片，收集上清液；S2：将所得的上清液用无菌过滤器过滤，收集滤液，在0℃‑4℃条件下，将所得滤液2000‑4000×g离心15min，收集上清液；S3：将步骤S2得到的上清液转移至超滤离心管，在0℃‑4℃条件下，3000‑5000×g离心30min，收集超滤液；S4：向步骤S3得到的超滤液内按与超滤液体积1∶1的比例加入5w/v％‑20w/v％聚乙二醇溶液，上下颠倒离心管，混匀，4℃孵育过夜；S5：将孵育后的液体在室温或4℃，1500×g离心30min，离心管底部可见米白色沉淀；去除上清，1500×g继续离心5min，去除上层的液体，得到的沉淀即为外泌体。