[发明专利]一种钢筋混凝土污水管腐蚀产物中微生物细胞的提取方法

摘要

本发明涉及一种钢筋混凝土污水管腐蚀产物中微生物细胞的提取方法，主要步骤包括按照要求分别配制焦磷酸钠溶液、蔗糖溶液以及氯化钠溶液，在焦磷酸钠溶液中加入混凝土或钢筋腐蚀产物，破碎混合均匀后，加入至蔗糖溶液中，离心，取上层清液再离心，去一半上清液，加入氯化钠溶液，再离心，去上清液。本发明在提取微生物DNA之前，先从腐蚀产物中提取微生物细胞的方法，大大提高了后续DNA提取、PCR扩增以及高通量测序的便利性及有效性，极大地拓展了微生物研究在钢筋混凝土污水管道以及其他腐蚀性环境中的应用。

主权项

一种钢筋混凝土污水管腐蚀产物中微生物细胞的提取方法，其特征在于，该提取方法包括如下步骤：(1)、配置0.2％的焦磷酸钠溶液，用硫酸调节其pH为2‑4，高温高压灭菌；(2)、配置1.33g/ml的蔗糖溶液，再经过0.22um的滤膜过滤消毒；(3)、配置0.8％的氯化钠溶液，高温高压灭菌；(4)、在鹰嘴管中加入体积为25‑30ml的0.2％且pH为2‑4的焦磷酸钠溶液，再加入质量为1‑1.5g的混凝土或钢筋腐蚀产物，搅拌混合均匀；(5)、在70‑80kHz工作频率下，利用超声波破碎仪对上述步骤(4)搅拌混合物进行破碎得到腐蚀产物焦磷酸钠混合匀浆，操作两次，每次30s；破碎的同时将鹰嘴管置于冰冷容器中防止混合匀浆温度过高；(6)、另取出一支新的鹰嘴管，加入体积为25‑30ml的1.33g/ml的蔗糖溶液；(7)、将上述步骤(5)中破碎得到的腐蚀产物焦磷酸钠混合匀浆缓慢倒入上述步骤(6)中蔗糖溶液的上层，对这个两相分层的溶液离心2‑4分钟，转速5500×g；(8)、将上述步骤(7)离心后的上层蔗糖清液倒入一个新的鹰嘴管中；(9)、对上述步骤(8)中的上层蔗糖清液再次离心5‑8分钟，转速18000×g，去除一半的上清液；(10)、将上述步骤(9)中剩余的一半上清液中加入等体积的0.8％氯化钠溶液进行稀释；(11)、对上述步骤(10)的溶液再次离心5‑8分钟，转速18000×g，去掉80‑90％的上清液，底部剩余的悬浊物即为浓缩微生物细胞液。