[发明专利]一种金针菇退化菌种的复壮方法

摘要

本发明涉及一种金针菇退化菌种的复壮方法，包括(1)退化菌丝的一次培养；(2)菌丝的二次培养；(3)菌丝单细胞提取；(4)菌丝细胞再生培养；(5)复壮菌丝检测。本发明对金针菇退化菌种进行复壮操作，将得到的复壮菌种与对照菌种进行比较，经复壮的菌种恢复原本农艺性状则说明复壮成功。本发明为金针菇退化菌种提供了一种复壮方法，该方法周期短、成本低、复壮效果好，适用于金针菇菌种的提纯复壮。

主权项

一种金针菇退化菌种的复壮方法，包括：(1)退化菌丝的一次培养：将金针菇退化菌种转接到马铃薯葡萄糖培养基中培养，得到平均直径为3～4mm的菌丝球；其中金针菇退化菌种与培养基的用量比为5～7g：100mL；(2)退化菌丝的二次培养：将步骤(1)得到的菌丝球打碎成悬液，滴入马铃薯葡萄糖培养基中培养得到絮状菌丝，经过滤得到过滤后的菌丝；其中悬液与培养基的体积比为8～12mL：50mL；(3)菌丝单细胞提取：过滤溶壁酶溶液，得到经过滤的溶壁酶溶液，加入步骤(2)得到的过滤后的菌丝充分混匀，使菌丝呈分散状态，进行培养，再次过滤，离心，然后加入蔗糖溶液混匀，得到悬液；其中溶壁酶溶液的浓度为0.5～1％(w/v％)；过滤后的菌丝、经过滤的溶壁酶溶液、蔗糖溶液的用量比为3～5g：6～8mL：2mL；(4)单细胞再生培养：稀释步骤(3)得到的悬液，得到稀释后的悬液，涂布于复壮培养基上，然后进行培养，得到星芒状菌落；其中稀释后的悬液与培养基的用量比为50uL：1000mL；(5)复壮菌丝检测：在步骤(4)得到的星芒状菌落中挑取30～50个单菌落移至新的复壮培养基平皿培养，镜检单菌落，选择生长速度快、菌丝浓白且镜检具有锁状联合的菌落继续培养，待菌落长满平皿后，转接健壮菌丝到新的PDA培养基，考察菌丝生长速度，并与未退化的母种进行栽培比较，与母种性状无显著性差异的菌株即为复壮的金针菇菌种。