[发明专利]一种连续深层发酵提取食用菌活性物质的方法

摘要

本发明提供了一种连续深层发酵提取食用菌活性物质的方法，将食用菌菌丝或子实体，在外加电磁场辅助下进行种子液培养，然后将种子液菌体进行固定化并使其带有磁性，将固定化的菌体，在高压脉冲电场的辅助下进行深层发酵。通过本发明所得到的食用菌活性物质具有以下优点：食用菌有效成分提取充分，生产周期大大减少。固定化菌体可进行多次发酵，磁性固定化菌体有利于产物的分离和纯化，降低下游技术的负担；改善了普通工艺提取食用菌活性物质存在的周期长、有效成分利用率低、染菌多等问题，为后续多元化生产提供技术基础。

主权项

1.一种连续深层发酵提取食用菌活性物质的方法，其特征在于,包括以下步骤：A1：取食用菌菌丝或子实体，洗净，干燥至水分含量为6~8%后，将其粉碎至100~120目获得粉末，将粉末与水按料液比1：（40~60）混合均匀，灭菌后得到种子料；A2：取将A1所得种子料在无菌条件下按15~20%的接种量接种至灭菌后的种子液培养基中，然后置于摇床上并通入电磁场培养24~96小时，培养温度23~25℃，得种子液；A3：将A2所得种子液离心获得的沉淀物，在无菌条件下与磁性海藻酸钠溶液混合均匀得到混合液；将混合液通过注射器滴入氯化钙溶液进行固化20~30min，得到磁性载菌体海藻酸钙凝珠；将磁性海藻酸钙凝珠用蒸馏水洗涤2~3次，然后与灭菌后的壁材溶液在无菌条件下混合，200~230rpm转速下振荡15~30min进行成膜反应，得到磁性载菌体微胶囊；所述的磁性海藻酸钠溶液，是将磁性材料加入到20~25mg/ml海藻酸钠溶液中混合均匀制备而得；所述壁材溶液浓度为0.8~1.2mg/ml；所述的氯化钙溶液浓度为18~22mg/ml；所述混合液与氯化钙溶液体积比为1：（1.5~2）；所述磁性海藻酸钙凝珠与壁材溶液体积比为1：（5~10）；A4：将深层发酵培养基按发酵罐体积的60~80%加入发酵罐中，搅拌均匀后，将发酵罐封好进行灭菌；待深层发酵培养基冷却后，将F3所得磁性载菌体微胶囊按接种量为10~12%接种至深层发酵培养基中得到深层发酵液；调节深层发酵液pH为5.2~6.2，控制深层发酵温度为22~25℃，无菌空气通气量为2.0~2.2m3/min，搅拌速度50~100r/min，罐压38~45kPa，并通入高压脉冲电场进行深层发酵，发酵72~168小时后，排出深层发酵醪液；所述深层发酵培养基含有以下重量百分比的组分：碳源3~5%、氮源0.15~0.3%、大豆分离蛋白3~5%、矿物质盐0.6~0.9%、促进剂1~1.8%、生长因子2~4%、组合氨基酸Ⅰ0.5~0.7%；所述的组合氨基酸Ⅰ为谷氨酸与甘氨酸1:1组合；所述碳源为葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、玉米粉、山芋粉、豆粕、可溶性淀粉中的一种或一种以上组合；所述氮源为蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、酵母膏、黄豆饼粉、玉米粉、硫酸铵、硝酸钾中一种或一种以上组合；所述的矿物质盐为硫酸亚铁、氯化钠、硫酸镁、氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、硫酸锌、氯化锌中的一种或一种以上组合；所述促进剂为橄榄油、中药提取物、茶叶提取物、垂盆草、板蓝根中的一种或一种以上组合；所述生长因子为蜂花粉、玉米粉、山茶油、枸杞粉中一种或一种以上组合；A5：将A4所得发酵醪液，过滤后，即可得到含有食用菌活性物质的溶液。