[发明专利]一种免疫组化抗原修复方法

摘要

本发明涉及一种免疫组化抗原修复方法，本技术方案通过蛋白酶K和脂肪酶与传统修复方法配合使用，寻找更佳的抗原修复方式，达到更好的免疫组化染色结果。蛋白酶K与柠檬酸高温高压修复配合使用，增强了大部分胞膜和胞核抗原的染色结果，特别是CD3、CD20、ER、ki‑67、p53和PR。脂肪酶虽然对部分抗原的作用不明显，甚至会产生负面的影响，例如CD3、CD20、CD56、CK516、PgP和PR，但是对部分抗原的染色效果依然有增强，特别是ER和p53。可见，对于胞膜和胞核定位的抗原，蛋白酶K能增强染色结果，特别是ER和ki‑67，增强效果达到50％以上。

主权项

一种免疫组化抗原修复方法，其特征在于，包括以下步骤：1)脱蜡和水化，将组织切片分别在二甲苯、无水乙醇、乙醇溶液及蒸馏水中浸泡；2)将经过脱蜡和水化后的组织节片用PBS冲洗，滴加配制好的蛋白酶K溶液或者脂肪酶溶液，室温孵育10分钟；3)抗原修复，根据不同的抗原选择相应的修复方法；4)甩去PBS，用PAP笔在组织切片周围画圈，油圈距离组织切片边缘2‑3mm；5)封闭内源性过氧化物酶，在组织切片上滴加过氧化物酶阻断试剂，室温下孵育10分钟，然后用PBS冲洗；6)甩去PBS，每张组织切片加1滴或50μl的第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜，用PBS冲洗；7)甩去PBS液，每张组织切片加1滴或50μl即用型MaxVisionTM试剂，室温下孵育10‑15分钟，用PBS冲洗；8)甩去PBS液，每张组织切片加2滴或100μl新鲜配制的DAB或AEC溶液，9)自来水冲洗，苏木素复染20秒，PBS浸泡20秒返蓝；如果DAB显色，则切片经过梯度酒精脱水干燥，中性树胶封固。