[发明专利]一种免疫组化抗原修复方法

权利要求书

1.一种免疫组化抗原修复方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)脱蜡和水化，将组织切片分别在二甲苯、无水乙醇、乙醇溶液及蒸馏水中浸泡；

2)将经过脱蜡和水化后的组织节片用PBS冲洗，滴加配制好的蛋白酶K溶液或者脂肪酶溶液，室温孵育10分钟；

3)抗原修复，根据不同的抗原选择相应的修复方法；

4)甩去PBS，用PAP笔在组织切片周围画圈，油圈距离组织切片边缘2-3mm；

5)封闭内源性过氧化物酶，在组织切片上滴加过氧化物酶阻断试剂，室温下孵育10分钟，然后用PBS冲洗；

6)甩去PBS，每张组织切片加1滴或50μl的第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜，用PBS冲洗；

7)甩去PBS液，每张组织切片加1滴或50μl即用型MaxVisionTM试剂，室温下孵育10-15分钟，用PBS冲洗；

8)甩去PBS液，每张组织切片加2滴或100μl新鲜配制的DAB或AEC溶液，

9)自来水冲洗，苏木素复染20秒，PBS浸泡20秒返蓝；如果DAB显色，则切片经过梯度酒精脱水干燥，中性树胶封固。

2.根据权利要求1所述的免疫组化抗原修复方法，其特征在于，在步骤1)中，二甲苯浸泡为在两个置有二甲苯的容器内，分别浸泡10分钟。

3.根据权利要求1所述的免疫组化抗原修复方法，其特征在于，在步骤1)中，无水乙醇浸泡为在两个置有无水乙醇的容器内，分别浸泡5分钟。

4.根据权利要求1所述的免疫组化抗原修复方法，其特征在于，在步骤1)中，在乙醇溶液中浸泡为，分别在95％乙醇中浸泡5分钟，在85％乙醇中浸泡5分钟，在70％乙醇中浸泡5分。

5.根据权利要求1所述的免疫组化抗原修复方法，其特征在于，在步骤2)、步骤5)及步骤7)中的PBS冲洗均为冲洗三次。

6.根据权利要求1所述的免疫组化抗原修复方法，其特征在于，在步骤9)中的梯度酒精脱水干燥是指使用酒精的溶液逐渐增高至无水乙醇。

7.根据权利要求1所述的免疫组化抗原修复方法，其特征在于，在步骤1)前还包括将组织切片在60℃恒温箱烘烤20分钟。