[发明专利]多种抗体标记的SERS探针和基底及其制备方法和应用

摘要

本发明属于分子生物学技术领域，具体为多种抗体标记的SERS探针和基底及其制备方法和应用。本发明采用采用多巴胺在自聚合条件下包埋结合多种抗体，得到聚多巴胺和抗体修饰的SERS基底和SERS标记探针，通过免疫结合作用力，利用拉曼光谱技术实现了胰腺癌细胞提取的外泌体以及临床胰腺癌病人的血清样本的高灵敏度检测和诊断，统计学数据分析发现基于MIF抗体的SERS平台能够实现胰腺癌的肿瘤分期判断。本发明中的SERS探针标记方法简单方便，用于胰腺癌外泌体的检测，快速灵敏，特异性高，所需样本量少，无需高速离心的分离过程，能适用于临床诊断和肿瘤分期转移判断。

主权项

一种多种抗体标记的SERS探针和基底的制备方法，其特征在于，具体步骤为：（1）在2~20mM核壳结构的金‑银纳米颗粒溶液中，加入anti‑MIF、anti‑GPC1、anti‑EGFR、 anti‑EpCAM、anti‑CD9、 anti‑CD63六种抗体，每种抗体的浓度为5~40μg/mL，每种抗体的加入量为30~150μL；并加入浓度为1~20mg/mL 的多巴胺溶液40~150μL；室温下反应0.5~4小时；反应后的溶液经过离心，再用去离子水进行分散；得到多种抗体标记的SERS探针：（2）取普通的玻璃载玻片泡于8~14M的NaOH中4~7h，再往溶液中添加浓度为10~100mg/ml的多巴胺溶液6~10ml，将上述培养皿放在专用摇床上摇0.5~2h，之后用去离子水冲洗干净；将修饰并清洗后的载玻片置于含有六种抗体anti‑MIF、anti‑GPC1、anti‑EGFR、anti‑EpCAM、anti‑CD9、anti‑CD63的体积浓度为0.2~2%的BSA中，其中，每种抗体的浓度为1~10mg/mL，反应0.5~3h；用去离子水冲洗1~3次后，自然晾干，得到基片。