[发明专利]一种治疗流感嗜血杆菌感染的血清的制备方法及该血清的应用

摘要

一种治疗流感嗜血杆菌感染的血清的制备方法及该血清的应用，属于生物技术领域。该方法包括：抗原表位融合片段的构建；串联表位融合片段的构建；串联式目的表位基因原核表达；目的重组融合蛋白水解和提纯；多抗原MAP交联肽制备；免疫获得血清。本发明将抗原优势表位融合后并串联后的重组表达蛋白与高分子核心基质交联形成MAP‑rHap‑C4‑GGGS‑Hap‑C150。不仅能保证抗原的免疫原性及其免疫机体后产生抗体的杀菌能力且能提高抗原制备效率，为大量抗体制备提供足够的抗原。

主权项

一种治疗流感嗜血杆菌感染的血清的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）以流感嗜血杆菌基因组DNA为模板，采用连接引物 PCR 分别扩增带柔性肽结构的hap‑C4和hap‑C150片段构建流感嗜血杆菌黏附Hap蛋白优势表位融合基因hap‑C4‑GGGS‑hap‑C150；2）以pUCm‑T‑hap‑C4‑GGGS‑hap‑C150为模板，采用引物携带EK序列互补构建hap‑C4‑GGGS‑hap‑C150‑EK串联表位融合片段；以pUCm‑T‑8[hap‑C4‑GGGS‑hap‑C150‑EK]为模板，扩增获得NdeI‑8×[Hap‑C4‑GGGS‑ Hap‑C150‑EK]‑XhoI片段；3）以NdeI‑8×[Hap‑C4‑GGGS‑Hap‑C150‑EK]–XhoI构建原核表达系统Ecoli BL21DE3pET42a‑8×[Hap‑C4‑GGGS‑ Hap‑C150‑EK]，原核表达系统Ecoli BL21DE3pET42a‑8×[Hap‑C4‑GGGS‑ Hap‑C150‑EK]诱导表达重组融合蛋白8×[rHap‑C4‑GGGS‑Hap‑C150‑EK]，重组融合蛋白8×[rHap‑C4‑GGGS‑Hap‑C150‑EK]水解提纯得到rHap‑C4‑GGGS‑Hap‑C150融合表位肽；4）用碳二亚胺法将rHap‑C4‑GGGS‑Hap‑C150与Poly‑Asp‑Lys载体大分子交联，制备出多抗原MAP交联肽MAP‑ rHap‑C4‑GGGS‑Hap‑C150；5）多抗原MAP交联肽MAP‑ rHap‑C4‑GGGS‑Hap‑C150免疫小鼠，获得治疗流感嗜血杆菌感染的血清。