[发明专利]倒地铃的组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种倒地铃的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：外植体处理：取倒地铃种子作为外植体，用羽衣草浸提液浸泡10～15min；外植体培养：处理后的外植体接种到含有L‑硒甲基硒代半胱氨酸、维生素C和牛磺酸的MS外植体培养基中；繁殖培养；壮苗培养：将繁殖培养得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，MS壮苗培养基含有L‑硒甲基硒代半胱氨酸、活性炭、卡那霉素，还添加有托玛琳石粉和远红外陶瓷粉；生根培养；以及炼苗与移栽。本发明能降低组培苗的褐化率、玻璃化率，提高移栽成活率，同时提高倒地铃的成苗率，能实现倒地铃的快速繁殖，从而实现倒地铃的规模化繁育。

主权项

1.一种倒地铃的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括下列步骤：S1、外植体处理：取倒地铃种子作为外植体，先用羽衣草浸提液浸泡10～15min，然后用蒸馏水冲洗5～10min，再用质量分数为2％～5％次氯酸钠溶液浸泡10～15min，再用无菌水冲洗15～20min，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到处理后的外植体；其中，所述羽衣草浸提液由以下重量份数组分制成：新鲜羽衣草50～60份、新鲜接骨木叶片10～15份、新鲜红兰花8～10份、乙醇10～15份以及无菌水300～500份；将上述重量份数的新鲜羽衣草、新鲜接骨木叶片、新鲜红兰花捣烂，然后加入上述重量份数的乙醇和无菌水，于30～50KHz频率下超声20～25min，超声温度控制在30～35℃，然后过滤除去滤渣，取滤液离心处理，再取上层清液，即制得所述羽衣草浸提液；S2、外植体培养：将S1中处理后的外植体接种到MS外植体培养基中，在温度为25～28℃、光照强度为800～1000lux、光照时间为8～10h/天的条件下培养20～25天，外植体发芽后得到无菌试管苗；其中，所述MS外植体培养基含有MS、0.3～0.6mg/L的细胞分裂素、0.3～0.5mg/L的L‑硒甲基硒代半胱氨酸、0.1～0.2mg/L维生素C、0.2～0.3mg/L牛磺酸、38g/L蔗糖以及5.6g/L的琼脂，pH值控制在5.6～6.0；S3、繁殖培养：将S2中得到的无菌试管苗剪切后置于MS繁殖培养基中，在温度为22～28℃、光照强度为1000～1200lux、光照时间为9～11h/天的条件下培养25～30天得到试管苗丛生芽；其中，所述MS繁殖培养基中含有MS、0.4～0.8mg/L的细胞分裂素、0.4～0.6mg/L的L‑硒甲基硒代半胱氨酸、0.2～0.3mg/L维生素C、0.3～0.4mg/L牛磺酸、35g/L蔗糖和5.8g/L的琼脂，pH值控制在5.6～6.0；S4、壮苗培养：将S3中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为25～30℃、光照强度为1200～1500lux，光照时间为10～12h/天的条件下培养20～25天，得到壮苗后的丛生芽；其中，所述MS壮苗培养基含有MS、0.01～0.02mg/L的细胞生长素、0.5～0.8mg/L的L‑硒甲基硒代半胱氨酸、1.5～2mg/L活性炭、3.5～4.5mg/L卡那霉素、30g/L蔗糖和6.2g/L的琼脂，pH值控制在5.6～6.0；S5、生根培养：将S4中得到的壮苗后的丛生芽置于MS生根培养基中，在温度为20～30℃、光照强度为1300～1600lux、光照时间为12～14h/天的条件下培养25～35天，得到带根的完整植株；其中，所述MS生根培养基含有MS、0.02～0.03mg/L的细胞生长素、0.6～1.0mg/L的L‑硒甲基硒代半胱氨酸、2～2.5mg/L活性炭、4.5～5.5mg/L卡那霉素、28g/L蔗糖和6.4g/L的琼脂，pH值控制在5.6～6.0；S6、炼苗与移栽：将S5中得到的带根的完整植株，在温度为18～25℃、自然通风的室内炼苗5～7天至植株表面角质形成后将苗取出，立即移栽到育苗基质中，在育苗基质继续生长25～35天后移栽到田地中；其中，所述育苗基质包括以下重量份数的组分：腐熟锯末10～15份、腐熟蔗渣8～10份、腐熟菇渣5～8份、腐熟鸡粪4～6份、蚯蚓粪1～3份、黑土20～30份、珍珠岩5～8份、草炭5～8份、硝酸钙1～2份、硝酸镁0.5～0.8份、磷酸二氢钾1～2份以及菌肥0.2～0.5份；S2、S3中的细胞分裂素均为玉米素、N6‑异戊烯基腺嘌呤、四氢吡喃苄基腺嘌呤中的任意一种；S4、S5中的细胞生长素均为萘乙酸、2,4‑二氯苯氧乙酸、2‑萘氧乙酸中的任意一种。