[发明专利]倒地铃的组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种倒地铃的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：外植体处理：取倒地铃种子作为外植体，用羽衣草浸提液浸泡10～15min；外植体培养：处理后的外植体接种到含有L‑硒甲基硒代半胱氨酸、维生素C和牛磺酸的MS外植体培养基中；繁殖培养；壮苗培养：将繁殖培养得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，MS壮苗培养基含有L‑硒甲基硒代半胱氨酸、活性炭、卡那霉素，还添加有托玛琳石粉和远红外陶瓷粉；生根培养；以及炼苗与移栽。本发明能降低组培苗的褐化率、玻璃化率，提高移栽成活率，同时提高倒地铃的成苗率，能实现倒地铃的快速繁殖，从而实现倒地铃的规模化繁育。

技术领域

本发明涉及倒地铃的繁育技术领域，具体地说是一种倒地铃的组织培养快速繁殖方法。

背景技术

倒地铃亦称心豆藤或白心籽，还有假苦瓜、风船葛、带藤苦楝、灯笼草的别名，无患子科多年生木质藤本植物，是一种中药材，具有清热、利尿、凉血、去瘀、解毒之效，能治肺炎、黄疸、糖尿病、淋病、疔疮、风湿、跌打损伤、蛇咬伤等，同时也是一种常见的观赏植物。倒地铃花为白色，果膨大近球形，种子黑色，有心形的白斑。倒地铃通常是作为一年生植物，由种子播种繁育而成，但是传统的播种繁殖法的出芽率和成苗率都不高，阻碍了倒地铃的快速规模化繁殖，因此迫切需要一种能够实现倒地铃种子快速繁育的方法。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种倒地铃的组织培养快速繁殖方法。其通过外植体处理、外植体培养、繁殖培养、壮苗培养、生根培养以及炼苗与移栽，提高倒地铃的成苗率，能实现倒地铃的快速繁殖，实现倒地铃的规模化繁育。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种倒地铃的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

S1、外植体处理：取倒地铃种子作为外植体，先用羽衣草浸提液浸泡10～15min，然后用蒸馏水冲洗5～10min，再用质量分数为2％～5％次氯酸钠溶液浸泡10～15min，再用无菌水冲洗15～20min，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到处理后的外植体；

其中，所述羽衣草浸提液由以下重量份数组分制成：新鲜羽衣草50～60份、新鲜接骨木叶片10～15份、新鲜红兰花8～10份、乙醇10～15份以及无菌水300～500份；将上述重量份数的新鲜羽衣草、新鲜接骨木叶片、新鲜红兰花捣烂，然后加入上述重量份数的乙醇和无菌水，于30～50KHz频率下超声20～25min，超声温度控制在30～35℃，然后过滤除去滤渣，取滤液离心处理，再取上层清液，即制得所述羽衣草浸提液；

S2、外植体培养：将S1中处理后的外植体接种到MS外植体培养基中，在温度为25～28℃、光照强度为800～1000lux、光照时间为8～10h/天的条件下培养20～25天，外植体发芽后得到无菌试管苗；

其中，所述MS外植体培养基含有MS、0.3～0.6mg/L的细胞分裂素、0.3～0.5mg/L的L-硒甲基硒代半胱氨酸、0.1～0.2mg/L维生素C、0.2～0.3mg/L牛磺酸、38g/L蔗糖以及5.6g/L的琼脂，pH值控制在5.6～6.0；

S3、繁殖培养：将S2中得到的无菌试管苗剪切后置于MS繁殖培养基中，在温度为22～28℃、光照强度为1000～1200lux、光照时间为9～11h/天的条件下培养25～30天得到试管苗丛生芽；

其中，所述MS繁殖培养基中含有MS、0.4～0.8mg/L的细胞分裂素、0.4～0.6mg/L的L-硒甲基硒代半胱氨酸、0.2～0.3mg/L维生素C、0.3～0.4mg/L牛磺酸、35g/L蔗糖和5.8g/L的琼脂，pH值控制在5.6～6.0；