[发明专利]一种利用丹参毛状根获得再生植株的方法

摘要

本发明提供一种利用丹参毛状根获得再生植株的方法，包括如下步骤将暗培养条件下新产生的丹参毛状根外植体切段，置于诱导培养基中，于25℃，暗培养一个月，诱导产生愈伤组织。然后移至25℃，16h/8h光/暗条件下培养，约7d后，在愈伤组织上形成不定芽。将长有不定芽的愈伤组织置于诱导培养基上继续进行扩繁培养。然后将不定芽从愈伤组织中切下，并转移至生根培养基，于25℃，16h/8h光/暗条件下培养。待不定根生长至2‑3厘米时，移栽至温室中进行炼苗处理，获得可正常生长的丹参植株。本发明提供的丹参毛状根再生植株方法，不定芽诱导率为50％以上，生根率为100％。本发明为丹参植株的快速扩繁及基因工程提供一种新的组织培养方法。

主权项

一种利用丹参毛状根获得再生植株的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将暗培养条件下新产生的丹参毛状根切成2‑3厘米的小段，置于诱导培养基中，于25℃条件下，暗培养一个月，诱导产生愈伤组织；然后移至25℃，16h/8h光/暗条件下培养；7d后，在愈伤组织上分化出绿色不定芽；(2)将长有绿色不定芽的愈伤组织转移至新鲜诱导培养中，进行扩繁培养，培养条件为25℃，16h/8h光/暗培养，2‑3周更换一次诱导培养基；(3)将不定芽从愈伤组织中切下，并转移至生根培养基，于25℃，16h/8h光/暗条件下培养，约1‑2周后长出不定根；待不定根生长至2‑3厘米时，移栽至温室中进行炼苗处理，获得可正常生长的丹参植株；(4)提取丹参再生植株叶片DNA，利用发根农杆菌roIB和roIC基因特异性引物进行PCR扩增，确定再生植株中整合了来自于发根农杆菌Ri质粒的诱导毛状根基因。