[发明专利]一种碱性果胶酶的高效率固定化方法

摘要

本发明公开了一种碱性果胶酶的高效率固定化方法，具体步骤为：首先制备纳米氧化硅分散液；将丙烯酰胺、N，N‑二甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸和去离子水混合搅拌得到单体水溶液，将其加入到分散液中，再加入引发剂，制得高分子包覆的纳米氧化硅微球，之后用戊二醛溶液处理，得到活化的高分子包覆的纳米氧化硅微球；配制质量浓度为1.5‑3.5％碱性果胶酶溶液，并和缓冲溶液混合后加入活化的高分子包覆的纳米氧化硅微球，500r/min转速下搅拌固定1‑5h，然后过滤，沉淀用去离子水洗涤感觉后，真空冷冻干燥，得到固定化碱性果胶酶。该方法制得的固定化果胶酶热稳定性好，酶失活小，且酶不易从载体脱落。

主权项

一种碱性果胶酶的高效率固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以环己烷为溶剂，加入无水乙醇、冰醋酸搅拌混合均匀后转移至带有冷凝管的三口烧瓶中，往三口烧瓶中缓慢滴加正硅酸乙酯，滴加完毕后缓慢升温至60‑70℃，继续往三口烧瓶中滴加三乙胺，滴加完毕后，升温至100‑120℃，回流反应8‑13h，反应结束后将反应产物在70℃下浓缩处理10min，得到的浓缩物和去离子水混合，滴加硅烷偶联剂，500W功率下超声处理1‑4h，得到分散液；(2)将丙烯酰胺、N，N‑二甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸和去离子水混合搅拌得到单体水溶液；将制得的单体水溶液滴加到步骤(1)制得的分散液中，搅拌混合均匀，加入引发剂，混合均匀后升温至60‑70℃，反应1‑3h，反应结束后冷却至室温，过滤，固体洗涤干净用盐酸浸泡处理，处理结束后过滤，过滤得到的沉淀用去离子水洗涤，真空干燥，得到高分子包覆的纳米氧化硅微球；(3)将上述制得的高分子包覆的纳米氧化硅微球和戊二醛溶液混合，300W功率下超声处理3‑5h，处理结束后，过滤，沉淀用去离子水洗涤，真空干燥，得到活化的高分子包覆的纳米氧化硅微球；(4)配制质量浓度为1.5‑3.5％碱性果胶酶溶液，并和缓冲溶液混合后加入活化的高分子包覆的纳米氧化硅微球，500r/min转速下搅拌固定1‑5h，然后过滤，沉淀用去离子水洗涤感觉后，真空冷冻干燥，得到固定化碱性果胶酶。