[发明专利]一种土壤DNA提取方法

摘要

本发明公开了一种土壤DNA提取方法，采用SDS‑溶菌酶法裂解土壤样本，得到裂解液；将所得的裂解液与5×SDS Loading Buffera按比例混匀后加入所得的蛋白胶梳孔内，按常规方法进行电泳，待电泳结束后，轻轻地将蛋白胶梳取出进行染色处理，当银白色的目的条带出现时，将目的条带切下，放入盛有2mLPBS的透析袋内，放入盛有适量的1×Tris‑Gly电泳缓冲液的水平电泳槽内，并将水平电泳槽置于冰上进行电泳；将所得的透析袋置于盛有灭菌的PBS的小烧杯内，4℃透析过夜，次日，收集透析袋内的上清液，即得土壤DNA提取液。本发明操作步骤简单，在操作中损失的DNA比较少，得到的DNA量稳定。

主权项

1.一种土壤DNA提取方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、采用SDS‑溶菌酶法裂解土壤样本，得到裂解液；具体包括如下步骤：用DNA提取缓冲液重悬土壤，加入蛋白酶K和溶菌酶，混匀后37℃反应20min；加入SDS，65℃水浴30min，25℃下10000×g离心10min，得到的上清液即为裂解液；所述DNA提取缓冲液的pH为8.0，由水和溶质组成；溶质及其在所述DNA提取缓冲液中的浓度如下：100mM Tris‑HCl，100mM EDTA·2Na，100mM磷酸钠，1.5M NaCl；S2、量取双蒸水2.45mL，30％的丙烯酰胺3.0mL，1.5mmol/L的Tris‑HCl 1.9mL，10％的十二烷基硫酸钠75.0μL，10％的APS 75.0μL，TEMED 3.0μL，充分混合，搅拌均匀后立即加入玻璃制胶平板中，再加入蒸馏水，在分离胶液面上覆盖一层厚1.0cm的水层，室温静置30‑40min，直至分离胶聚合；S3、量取双蒸水2.1mL，30％的丙烯酰胺0.5mL，1.0mmol/L的Tris‑HCl 0.38mL，10％的SDS 30.0μL，10％的APS 30.0μL，TEMED3.0μL，充分混合后，得5％的浓缩胶；S4、倒掉步骤S2所得的制胶平板上面的水层，用蒸馏水洗涤，滤纸吸干分离胶顶端的水后，保持液面和玻璃板上沿齐平，加入所得的浓缩胶后立即在玻璃板之间插入间距为0.75mm的梳子，室温静置20‑30min，待浓缩胶完全聚合后，轻轻拔出梳子，得蛋白胶梳；S5、将所得的裂解液与5×SDS Loading Buffera按体积比4∶1混匀后加入步骤S4所得的蛋白胶梳孔内，按常规方法进行电泳，待电泳结束后，轻轻地将蛋白胶梳取出，放入洁净的培养皿内，加入适量的0.1mol/L的KCl染色10‑20min，当银白色的目的条带出现时，用干净的刀片将目的条带切下，放入盛有2mLPBS的透析袋内，放入盛有适量的1×Tris‑Gly电泳缓冲液的水平电泳槽内，并将水平电泳槽置于冰上，将电压调至180V，电泳40‑50min，待目的胶带由淡蓝色变为透明时，电泳结束；S6、将步骤S5所得的透析袋置于盛有灭菌的PBS的小烧杯内，4℃透析过夜，次日，收集透析袋内的上清液，即得土壤DNA提取液。