[发明专利]一种获得具高杀伤肿瘤细胞能力的淋巴细胞亚群的方法在审
| 申请号： | 201710571084.8 | 申请日： | 2017-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN107164323A | 公开（公告）日： | 2017-09-15 |
| 发明（设计）人： | 崔文超;赵小慧 | 申请（专利权）人： | 山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 山东舜天律师事务所37226 | 代理人： | 李新海 |
| 地址： | 250101 山东省济南*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种获得具高杀伤肿瘤细胞能力的淋巴细胞亚群的方法，包括以下步骤(1)从脐血或成人外周血中分离出单个核细胞，进行体外培养；同时，分离出的血浆用于制备自体血清添加物；(2)对体外培养的单个核细胞进行细胞因子活化刺激；(3)培养3天后，根据细胞的生长情况，进行补液操作；培养14天后，获得具高杀伤肿瘤细胞能力的淋巴细胞亚群，检测细胞表型。本发明能够解决未经培养的MNC中特异杀伤性T淋巴细胞比例低、淋巴细胞增殖能力低、经典CIK培养肿瘤细胞杀伤性细胞占比低等问题，获得具有高比例CD3+CD56+细胞和CD16+CD56+细胞的淋巴细胞亚群。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 获得 杀伤 肿瘤 细胞 能力 淋巴细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种获得具高杀伤肿瘤细胞能力的淋巴细胞亚群的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)从脐血或成人外周血中分离出单个核细胞，进行体外培养；同时，分离出的血浆用于制备自体血清添加物；(2)对体外培养的单个核细胞进行细胞因子活化刺激：向含单个核细胞的培养物中加入终浓度为1000IU/ml的INF‑γ；再添加培养物总体积5％的自体血清添加物，37℃、5.0％CO2条件下培养；24小时后，加入OKT3抗体、IL‑2和IL‑1a，OKT3抗体终浓度为50ng/ml，IL‑2终浓度为1000IU/ml，IL‑1a终浓度为100IU/mL，37℃、5.0％CO2条件下继续培养；所述自体血清添加物，是通过以下方法制备得到的：将步骤(1)中分离出的血浆，于56℃环境下静置30min，然后于‑20℃环境下静置10min；3000rpm离心10min，收集血清，添加IL‑12至终浓度为1000pg/ml，即得自体血清添加物；(3)培养3天后，根据细胞的生长情况，进行补液操作，使细胞生长密度保持在1×106～2×106/ml；培养14天后，获得具高杀伤肿瘤细胞能力的淋巴细胞亚群。
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