[发明专利]一种同时检测小麦叶片中七种内源激素的方法

摘要

本发明公开了一种同时检测小麦叶片中七种内源激素的方法，所述内源激素为ZR、ZT、JA、SA、ABA、GA₃、GA₄，采用UPLC‑MS/MS，色谱条件为：流动相A：0.1％乙腈、0.05％甲酸水溶液，流动相B：甲醇，梯度洗脱。本发明的方法，特异性强，灵敏度高，通量高，结果客观易于分析，不仅可以对小麦生长发育中内源激素的失衡等进行确定，还可以为小麦外源激素的补充提供指导，减少盲目补充外源激素的现象的发生。

主权项

1.一种同时检测小麦叶片中七种内源激素的方法，其特征是：所述内源激素为ZR、ZT、JA、SA、ABA、GA₃、GA₄，采用UPLC‑MS/MS，色谱条件为：色谱柱为C18，1.7μm，2.1×100mm，流动相A：0.1％乙腈、0.05％甲酸水溶液，流动相B：甲醇，梯度洗脱；所述梯度洗脱为：0‑0.2min，90％A，0.2‑2min，90％A‑10％A线性降低，2‑3min，10％A，3‑3.1min，10％A‑90％A线性提高，3.1‑5min，90％A；所述检测方法的具体步骤为：(1)样品处理：将液氮条件下磨碎的小麦叶片中加入萃取剂后混匀，所述萃取剂为丙酮：柠檬酸水溶液＝70:30，体积比；(2)加入混合内标混匀，所述混合内标包含DHJA、D₆‑SA、D₆‑ABA、D₂‑GA₄、D₅‑ZR、D₅‑ZT 6种；(3)将步骤(2)中的混合物于避光低温条件下摇床上摇匀；(4)将步骤(3)处理后的混合物去除丙酮后，加入乙醚混匀，离心取上清液；(5)将步骤(4)得到的上清液去除色素挥发乙醚后加入甲醇溶解，过滤后采用超高效液相色谱串联质谱对JA、SA、ABA、ZR、ZT测定；(6)将步骤(4)得到的上清液进行固相萃取，具体如下：固相萃取柱为：Waters Oasis MAX固相萃取小柱，活化：甲醇、2％氨水，体积比为1:1，上样，淋洗1：2％氨水，淋洗2：甲醇，洗脱：1％甲酸‑甲醇，挥发洗脱液后加入甲醇溶解，过滤后采用超高效液相色谱串联质谱对GA₃、GA₄测定。