[发明专利]一种程序性坏死诱导系统的建立方法在审
| 申请号： | 201710511865.8 | 申请日： | 2017-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN107164411A | 公开（公告）日： | 2017-09-15 |
| 发明（设计）人： | 张志东;秦晓东;甘晓丽;李彦敏 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;C12N9/12 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 730046 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种程序性坏死诱导系统的建立方法，将RIPK3‑2×FKBP目的基因片段连入含有Tet‑On系统的慢病毒载体，构建可诱导表达的系统；经测序正确的载体与慢病毒元件载体共转染至293T细胞，收集病毒液感染Hela细胞和A549细胞，通过嘌呤霉素筛选得到稳定的细胞系；通过向培养基中加入多西环素诱导稳定细胞表达RIPK3‑2×FKBP蛋白，然后再加入二聚物诱导RIPK3二聚化；通过免疫印迹实验以及相关的实验技术手段分析实验结果。本发明的有益效果是通过Dox和Idimer诱导细胞发生程序性坏死，其灵敏度、效率更高，特异性更强，能够快速诱导细胞发生坏死。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 程序性 坏死 诱导 系统 建立 方法 | ||
【主权项】：
一种程序性坏死诱导系统的建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤1：将RIPK3‑2×FKBP目的基因片段连入含有Tet‑On系统的慢病毒载体，构建可诱导表达的系统，通过四环素或其类似物能调节目的基因的表达；步骤2：经测序正确的载体与慢病毒元件载体共转染至293T细胞，生产病毒粒子，收集病毒液感染Hela细胞和A549细胞，通过嘌呤霉素筛选得到稳定的细胞系；步骤3：通过向培养基中加入多西环素诱导稳定细胞表达RIPK3‑2×FKBP蛋白，然后再加入二聚物诱导RIPK3二聚化；步骤4：通过免疫印迹实验以及相关的实验技术手段分析实验结果。
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