[发明专利]一种利用廉价原料生产四甲基吡嗪的方法

摘要

本发明公开了一种利用廉价原料生产四甲基吡嗪的方法，将α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和NADH氧化酶基因的核苷酸序列进行密码子优化；拼接获得包含该三个基因的基因簇；将基因簇插入表达载体中，获得多顺反子重组质粒；再导入宿主菌E.coli，获得生产乙偶姻的基因工程菌株；将活化的菌株接种至含廉价原料的发酵培养基进行发酵培养，获得含有乙偶姻的发酵液；取发酵液进行离心处理，取上清液，再加入磷酸氢二铵，发酵产生的乙偶姻与NH4+反应合成四甲基吡嗪。本发明提供的菌株能有效利用来源广泛、成本低廉的原料生产高浓度前体物质乙偶姻，氧化型辅酶NAD+能够有效再生，可提高乙偶姻产量和生产效率，从而有效降低四甲基吡嗪的生产成本，缩短生产周期。

主权项

一种利用廉价原料生产四甲基吡嗪的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）将α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和NADH氧化酶基因的核苷酸序列进行密码子优化；（2）将经密码子优化的α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和NADH氧化酶基因进行拼接获得包含该三个基因的基因簇；（3）将基因簇插入表达载体中，获得多顺反子重组质粒；（4）将多顺反子重组质粒导入宿主菌E. coli，获得生产乙偶姻的基因工程菌株；（5）对木薯粉、氮源原料进行水解，得发酵培养基，将活化的生产乙偶姻的基因工程菌株接种至发酵培养基进行发酵培养，获得含有乙偶姻的发酵液；（6）取上述发酵液进行离心处理，取上清液，再加入磷酸氢二铵，在加热条件下，乙偶姻与NH4+反应合成四甲基吡嗪。