[发明专利]一种基于痕量荧光免疫定量检测PSI-OAm-NAPI两亲聚合纳米药物载体的方法

摘要

本发明公开了一种基于痕量荧光免疫定量检测PSI‑OAm‑NAPI两亲聚合纳米药物载体的方法，通过将PSI‑OAm‑NAPI水解后制备得到MFAP的免疫抗原和包被抗原，将MFAP包被抗原经包被液稀释后包被于酶标板中，封闭、加入不同浓度的MFAP标准品，以FITC标记的MFAP抗体作为一抗，建立直接竞争荧光免疫分析定量检测MFAP；该法不仅充分利用了免疫学反应中抗原抗体的高特异性还与荧光的敏感性相结合，使免疫反应的信号进一步提高，利用所发出荧光的强弱，来进行定量分析。该方法方便快捷、检测成本低、专一性强、灵敏度高，可进行高通量测定。

主权项

1.一种基于痕量荧光免疫定量检测PSI‑OAm‑NAPI两亲聚合纳米药物载体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a、水解PSI‑OAm‑NAPI，得到水解后的MFAP溶液；b、制备MFAP的免疫抗原和包被抗原；c、MFAP纳米药物载体高特异性抗体的制备，所述抗体的效价为1:64000；d、FITC标记的MFAP荧光抗体的制备；e、将MFAP包被抗原经包被液稀释后包被于酶标板中，封闭、加入不同浓度的MFAP标准品，以FITC标记的MFAP抗体作为一抗，建立直接竞争荧光免疫分析定量检测MFAP；f、以MFAP标准品浓度的对数为横坐标，荧光强度值为纵坐标绘制标准曲线，从而定量检测出MFAP的浓度；所述步骤a具体包括以下步骤：将PSI‑OAm‑NAPI纳米粒子与聚乙二醇‑聚乳酸羟基乙酸共聚物(PEG‑PLGA)溶解于三氯甲烷溶液中，加入新配置的氢氧化钠溶液超声，蒸发除去三氯甲烷；最后经过离心取沉淀分散于PBS中得到水解后的MFAP溶液。