[发明专利]一种诱导多能干细胞分泌素的制备方法及其应用

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种诱导多能干细胞分泌素的制备方法及其应用。本发明提供的诱导多能干细胞分泌素的制备方法，包括诱导多能干细胞处理、诱导多能干细胞增殖、诱导多能干细胞分泌素获取和纯化、浓缩，即通过培养诱导多能干细胞，取上清液，过滤，浓缩得到诱导多能干细胞分泌素。本发明制备方法简单易行，适宜大规模生产，有效提高了诱导多能干细胞分泌素的产量，且本发明制备的诱导多能干细胞分泌素可有效应用于保健品及化妆品中。

主权项

1.一种诱导多能干细胞分泌素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:Sl重悬诱导多能干细胞，得诱导多能干细胞悬液:S2将步骤Sl所得诱导多能干细胞悬液分布于三维载体，并置于一生物反应器的诱导多能干细胞培养液基中，在37℃、5％CO₂条件下培养24‑72h，得诱导多能干细胞:S3在步骤S2中诱导多能干细胞分裂旺盛阶段，用磷酸缓冲液冲洗诱导多能干细胞和三维载体2‑4次，然后向生物反应器中加入基础培养液IMDM/F12与磷酸缓冲液继续培养6‑24h，收集生物反应器中的上清液，得分泌素溶液:S4将步骤S3所得分泌素溶液离心，超膜过滤，浓缩，即得；所述步骤S2中细胞培养基包括基础培养基IMDM/F12和添加剂:其中，添加剂为2‑4mg/mL人白蛋白、40‑60μg/mL维生素C和3‑7mg/mL人参皂苷单体Rbl；所述步骤S4中浓缩方式为通过切向流过中空纤维超滤柱，体积浓缩1/8；所述超膜过滤截留的分子量的为30KD。