[发明专利]一种鸡蛋鸡肉中阿奇霉素的快速检测方法

摘要

本发明公开了一种鸡蛋鸡肉中阿奇霉素的快速检测方法，采用配备荧光检测器的超高效液相色谱仪，通过确定鸡蛋鸡肌肉样品的衍生条件、内标物质、色谱条件，以内标标准曲线方程计算鸡蛋和鸡肌肉中AZM的含量，建立了鸡蛋和鸡肉中AZM的一种灵敏度高、精密度和准确度高的快速分析方法。本发明的优势是方法分析速度快，准确性高，检测限低。该法上机分析时间仅需3min，为传统HPLC的1/8，样品前处理不采用繁琐的固相萃取，且本发明方法采用内标法准确度高，检测限低至17μg/kg；节约成本，避免使用昂贵仪器、固相萃取柱等贵重耗材，减少有机溶剂使用量，在蛋鸡无抗养殖、鸡蛋、鸡肉中阿奇霉素AZM的监测领域具有广泛应用前景。

主权项

一种鸡蛋鸡肉中阿奇霉素的快速检测方法，其特征在于，采用配备荧光检测器的超高效液相色谱仪检测鸡蛋鸡肉中阿奇霉素，内标液采用罗红霉素(ROX)，提取液为乙醚，溶解液为乙腈，衍生液为9‑芴甲基氯甲酸酯(FMOC‑CL)，衍生缓冲液为磷酸盐，衍生终止液为甘氨酸；具体的样品前处理方法：鸡蛋或鸡胸肌样品匀浆后准确称取1g(精确至0.0001)，置于50mL带盖离心管中，加入1μg/mL罗红霉素内标液100μL，加入10mL乙醚提取30min，8500r/min离心15min，收集上清液于50mL聚丙烯离心管，再加入10mL乙醚提取液提取，合并上清液，45℃水浴氮气浓缩至干，采用700μL乙腈溶解，待衍生；柱前衍生化条件和方法：加入100μL9‑芴甲基氯甲酸酯(FMOC‑CL)(2mg/mL)和200mL、0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH值7.36)，涡旋10s后放置于恒温水浴锅中50℃水浴55min，衍生结束后样品冷却至室温，加入10μL、0.1mol/L甘氨酸终止液，涡旋1min，经0.22μm聚四氟乙烯滤膜过滤，上机检测；采用超高效液相色谱仪检测经过处理衍生的鸡蛋和鸡肌肉中的阿奇霉素AZM，通过以标准品的色谱峰面积/内标色谱峰面积(y)对标准品质量浓度/内标质量浓度(x)绘制标准曲线(内标法)，获得曲线方程计算鸡蛋和鸡肌肉中的阿奇霉素AZM的含量，具体色谱条件为：1)色谱柱型号：BEH C18，1.7μm，50*2.1mm；2)流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾和乙腈，其中0.01mol/L磷酸二氢钾∶乙腈比例为24∶76v/v，pH值7.4；3)流速：0.45mL/min；4)进样体积：1μL；5)柱温：30℃；6)荧光检测器，激发波长(excitation wavelength)EX：270nm，发射波长(emission wavelength)EM：309nm，分析总时间为3min。