[发明专利]一种鸡蛋鸡肉中阿奇霉素的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种食品中阿奇霉素的快速检测方法，尤其是一种鸡蛋鸡肉中阿奇霉素的快速检测方法。

背景技术

阿奇霉素(Azithromycin，AZM)属于15元环大环内酯类(Macrolide，MAL)抗生素，临床上用于人上下呼吸道、泌尿道、皮肤及软组织感染和性传播疾病的预防和治疗，目前已被农业部列为畜禽禁用兽药。

目前，阿奇霉素AZM违规用于畜禽养殖，会影响畜禽疫病防治和畜禽产品安全、增加细菌产生耐药性的风险、威胁人类健康。虽然国家明令禁止，但养殖环节带来的经济效益受损，养殖户将抗生素添加于饲料中或通过其他途径使用，导致人用抗生素仍被滥用于畜禽，已成为威胁畜禽产品安全的新隐患。目前国内外尚未颁布任何基质中AZM的检测标准，国内外学者已开展部分基质中AZM检测技术研究，采用紫外检测器的HPLC法，AZM吸收弱灵敏度极低、采用荧光检测器的HPLC法，AZM测定耗时，采用HPLC/MS/MS需要昂贵的仪器设备，且需要同位素内标，推广难度大，因此测定鸡蛋、鸡肉等基质中AZM检测技术未见研究报道，且缺少快速易推广的分析方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种鸡蛋鸡肉中阿奇霉素的快速检测方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种鸡蛋鸡肉中阿奇霉素的快速检测方法，采用配备荧光检测器的超高效液相色谱仪检测鸡蛋鸡肉中阿奇霉素，内标液采用罗红霉素(ROX)，提取液为乙醚，溶解液为乙腈，衍生液为9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC-CL)，衍生缓冲液为磷酸盐，衍生终止液为甘氨酸；具体的样品前处理方法：鸡蛋或鸡胸肌样品匀浆后准确称取1g(精确至0.0001)，置于50mL带盖离心管中，加入1μg/mL罗红霉素内标液100μL，加入10mL乙醚提取30min，8500r/min离心15min，收集上清液于50mL聚丙烯离心管，再加入10mL乙醚提取液提取，合并上清液，45℃水浴氮气浓缩至干，采用700μL乙腈溶解，待衍生；柱前衍生化条件和方法：加入100μL9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC-CL)(2mg/mL)和200mL、0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH值7.36)，涡旋10s后放置于恒温水浴锅中50℃水浴55min，衍生结束后样品冷却至室温，加入10μL、0.1mol/L甘氨酸终止液，涡旋1min，经0.22μm聚四氟乙烯滤膜过滤，上机检测；

采用超高效液相色谱仪检测经过处理衍生的鸡蛋和鸡肌肉中的阿奇霉素AZM，通过以标准品的色谱峰面积/内标色谱峰面积(y)对标准品质量浓度/内标质量浓度(x)绘制标准曲线(内标法)，获得曲线方程计算鸡蛋和鸡肌肉中的阿奇霉素AZM的含量，具体色谱条件为：

1)色谱柱型号：BEH C18，1.7μm，50*2.1mm；

2)流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾和乙腈，其中0.01mol/L磷酸二氢钾∶乙腈比例为24∶76v/v，pH值7.4；

3)流速：0.45mL/min；

4)进样体积：1μL；

5)柱温：30℃；

6)荧光检测器，激发波长(excitation wavelength)EX：270nm，发射波长(emission wavelength)EM：309nm，分析总时间为3min。

其中，所述的标准品的制备方法：准确称取50mg阿奇霉素标准品和50mg罗红霉素，分别加入甲醇溶解并定溶于50mL容量瓶中，分别得到质量浓度为1mg/mL的阿奇霉素标准储备溶液和罗红霉素内标储备溶液，再通过甲醇稀释制备得到1μg/mL的阿奇霉素标准储备溶液和罗红霉素内标储备溶液，-20℃保存。

所述的pH值调节液的制备方法：准确称取10g氢氧化钾置于100mL容量瓶中，加入90mL超纯水溶解并定容，得到质量浓度为10％的氢氧化钾溶液。

所述的衍生液的制备方法：准确称取102.4mg的9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC-CL)，置于50mL容量瓶，乙腈溶解并定容，制得浓度为2mg/mL的9-芴甲基氯甲酸酯溶液。

所述的衍生终止液的制备方法：准确称取383mg的甘氨酸，置于50mL容量瓶，超纯水溶解并定容，制得浓度为0.1mol/L甘氨酸溶液。

所述的流动相中磷酸盐的制备方法：准确称取1.374g的磷酸二氢钾，置于1000mL容量瓶，超纯水溶解并定容，制得浓度为0.01mol/L磷酸盐缓冲液，采用10％的氢氧化钾溶液调节pH值至7.4。