[发明专利]一种动物细胞融合基础培养基的使用方法

摘要

本发明公开了一种动物细胞融合基础培养基的使用方法，包括以下步骤包括以下步骤(A)准备小鼠骨髓瘤细胞、免疫小白鼠脾细胞、基础培养基、灭菌后4℃保存的聚乙二醇4000、饲养细胞四板，每个板上有96个孔，每孔的体积为100μl；(B)用基础培养基吹洗小鼠骨髓瘤细胞后，将小鼠骨髓瘤细胞加入至50ml离心管中，并同时加入复苏的免疫小白鼠脾细胞，混匀后离心；(C)离心完成后除去离心管中的上清液，将细胞沉淀轻轻混匀后，沿着管壁在60秒内加入缓慢加入800μl的PEG4000，加完后静置90秒；(D)加入50ml培养基后离心；(E)离心完成后除去上清液，加入基础培养基混匀后，用加样枪将其转入板中；(F)放入5％CO2的孵箱培养七天后，全换液。

主权项

一种动物细胞融合基础培养基的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：(A)准备小鼠骨髓瘤细胞、免疫小白鼠脾细胞、基础培养基、灭菌后4℃保存的聚乙二醇4000、饲养细胞四板，每个板上有96个孔，每孔的体积为100μl；(B)用基础培养基吹洗小鼠骨髓瘤细胞后，将小鼠骨髓瘤细胞加入至50ml离心管中，并同时加入复苏的免疫小白鼠脾细胞，混匀后离心；(C)离心完成后除去离心管中的上清液，将细胞沉淀轻轻混匀后，沿着管壁在60秒内加入缓慢加入800μl的PEG4000，加完后静置90秒；(D)加入50ml培养基后离心；(E)离心完成后除去上清液，加入基础培养基混匀后，用加样枪将其转入板中；(F)放入5％CO2的孵箱培养七天后，全换液；上述步骤中，基础培养基的组分包括：丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰氨、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸二钠、缬氨酸、氯化钙、硫酸镁、氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、生物素、氯化胆碱、肌醇、尼克酰胺、D‑泛酸、吡哆醛、硫胺素、核黄素、抗坏血酸、维生素B‑12、对氨基苯甲酸、叶酸、D‑葡萄糖、酚红、丙酮酸钠、胸苷、还原型谷胱甘肽、碳酸氢钠、氢氧化钠、氯化钠、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸。