[发明专利]还原性释放糖蛋白N-糖链及其衍生物分离和分析鉴定的方法

摘要

本发明属于糖生物技术领域，具体涉及一种还原性释放糖蛋白N‑糖链及其衍生物制备、分离和分析鉴定的方法。本发明还原性释放糖蛋白N‑糖链的方法为先将糖蛋白溶于浓氨水中进行糖链的水解，然后经NaBH3CN的还原，得到还原端带有活性氨基(NH2)的糖胺，该方案通用性强，适用于中性N‑糖链、酸性N‑糖链和含有核心α‑1,3‑岩藻糖糖基化的中性N‑糖链，释放的N‑糖链稳定性高，不会发生降解，可以直接进行初步的分析。此外，本发明提供了对所得到的N‑糖链进行Fmoc标记的方法，还提供了对N‑糖链和Fmoc标记的N‑糖链进行分离和分析鉴定的方法。

主权项

一种还原性释放糖蛋白N‑糖链的方法，其包括以下步骤：(1)取糖蛋白样品，溶于浓氨水中，糖蛋白样品在氨水中的浓度为5～20mg/mL；(2)向反应体系中加入NaBH3CN固体至反应体系中NaBH3CN的浓度为1mol/L，得到的混合物在40℃下反应16小时；(3)反应结束后，减压浓缩反应体系，加水重新溶解后，调节pH至中性，再次浓缩除去溶剂，即得糖蛋白N‑糖链粗品。