[发明专利]一种激肽释放酶7在血液中的含量检测方法及其作为诊断胰腺癌的血清标志物上的应用在审
| 申请号： | 201710374234.6 | 申请日： | 2017-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN108931651A | 公开（公告）日： | 2018-12-04 |
| 发明（设计）人： | 郑军;谭潇;刘森;李林;张丁 | 申请（专利权）人： | 宜昌市中心人民医院 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/574 |
| 代理公司： | 宜昌市三峡专利事务所 42103 | 代理人： | 蒋悦 |
| 地址： | 443000 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供一种激肽释放酶7在血液中的含量检测方法，具体为将所收集的待测血液样品按要求于4℃冰箱静置12小时后离心取上清液并保存于‑80℃冰箱。检测前血清用1×PBS液按1：5进行稀释分装待检测实验；分配96孔酶联板，加入50μL待测血清样品，轻摇孵育2h；去除孔内的液体，加入wash buffer洗孔3次，每次加入washbuffer后放置摇床5min，将吸水纸平铺于桌面，轻拍酶联板将孔内液体去除干净；加入HRP于每孔内，轻摇孵育；再加入TMB液孵育30min；向每孔内加入100μl stop solution终止反应；加入stop solution终止液后轻摇混匀，确保蓝色全部变为黄色；测量光密度（OD值），根据标准曲线将光密度（OD值）转换为KLK7在血清中的含量值，即可完成激肽释放酶7在血液中的含量检测。 | ||
| 搜索关键词： | 激肽释放酶 含量检测 血清 血液 孵育 冰箱 待测血清样品 血清标志物 诊断胰腺癌 标准曲线 取上清液 血液样品 液体去除 测量光 酶联板 吸水纸 液孵育 终止液 检测 稀释 分装 混匀 平铺 去除 洗孔 摇床 桌面 保存 转换 分配 应用 | ||
【主权项】：
1.一种激肽释放酶7在血液中的含量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1) 收集胰腺癌患者血清，于4℃冰箱静置10‑15小时后离心取上清液保存于‑80℃冰箱，实验前一天所有血清样品用1×PBS液按1：5比例进行稀释分装待实验检测；(2) 分配96孔酶联板，分别向每个酶联孔内加入待测血清；(3) 向每个孔内加入KLK7抗体于室温下置于摇床上轻摇孵育，去除孔内的液体，加入1×wash buffer洗孔，每次加入washbuffer后放置摇床；(4) 将吸水纸平铺于桌面，轻拍酶联板使孔内液体去除干净；(5) 加入HRP于每孔内，于室温下置于摇床上轻摇孵育；(6) 重复步骤4和5的步骤1次；(7) 向每孔内加入TMB液置于摇床上于室温下孵育；(8) 向每孔内加入 stop solution 终止液终止反应；(9) 加入终止液stop solution终止液后轻摇混匀，确保蓝色全部变为黄色；(10) 用450nm波长酶标仪测量各孔的光密度；(11) 根据标准曲线将光密度（OD值）转换为KLK7在血清中的含量值，即可完成激肽释放酶7在血液中的含量检测。
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