[发明专利]一种激肽释放酶7在血液中的含量检测方法及其作为诊断胰腺癌的血清标志物上的应用在审
| 申请号： | 201710374234.6 | 申请日： | 2017-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN108931651A | 公开（公告）日： | 2018-12-04 |
| 发明（设计）人： | 郑军;谭潇;刘森;李林;张丁 | 申请（专利权）人： | 宜昌市中心人民医院 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/574 |
| 代理公司： | 宜昌市三峡专利事务所 42103 | 代理人： | 蒋悦 |
| 地址： | 443000 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 激肽释放酶 含量检测 血清 血液 孵育 冰箱 待测血清样品 血清标志物 诊断胰腺癌 标准曲线 取上清液 血液样品 液体去除 测量光 酶联板 吸水纸 液孵育 终止液 检测 稀释 分装 混匀 平铺 去除 洗孔 摇床 桌面 保存 转换 分配 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种激肽释放酶7在血液中的含量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1) 收集胰腺癌患者血清，于4℃冰箱静置10-15小时后离心取上清液保存于-80℃冰箱，实验前一天所有血清样品用1×PBS液按1：5比例进行稀释分装待实验检测；
(2) 分配96孔酶联板，分别向每个酶联孔内加入待测血清；
(3) 向每个孔内加入KLK7抗体于室温下置于摇床上轻摇孵育，去除孔内的液体，加入1×wash buffer洗孔，每次加入washbuffer后放置摇床；
(4) 将吸水纸平铺于桌面，轻拍酶联板使孔内液体去除干净；
(5) 加入HRP于每孔内，于室温下置于摇床上轻摇孵育；
(6) 重复步骤4和5的步骤1次；
(7) 向每孔内加入TMB液置于摇床上于室温下孵育；
(8) 向每孔内加入 stop solution 终止液终止反应；
(9) 加入终止液stop solution终止液后轻摇混匀，确保蓝色全部变为黄色；
(10) 用450nm波长酶标仪测量各孔的光密度；
(11) 根据标准曲线将光密度（OD值）转换为KLK7在血清中的含量值，即可完成激肽释放酶7在血液中的含量检测。
2.权利要求1所述的激肽释放酶7在作为诊断或辅助诊断胰腺癌过程中的血清标志物上应用。
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