[发明专利]一种激肽释放酶7在血液中的活性检测方法及其作为诊断胰腺癌的血清标志物上的应用在审
| 申请号： | 201710373623.7 | 申请日： | 2017-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN108931650A | 公开（公告）日： | 2018-12-04 |
| 发明（设计）人： | 谭潇;刘森;郑军;李林;张丁 | 申请（专利权）人： | 宜昌市中心人民医院 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/574 |
| 代理公司： | 宜昌市三峡专利事务所 42103 | 代理人： | 蒋悦 |
| 地址： | 443000 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供一种激肽释放酶7在血液中的活性检测方法，具体为将所收集的待测血液样品于4℃冰箱静置12小时后离心取上清液并保存于‑80℃冰箱。检测前血清用1×PBS液按1：5进行稀释分装待检测实验；分配96孔酶联板，加入50μL待测血清样品，轻摇孵育2h；去除孔内的液体，加入wash buffer洗孔3次，每次加入washbuffer后放置摇床5min，将吸水纸平铺于桌面，轻拍酶联板使孔内液体去除干净；加入KLK7 FRET荧光底物McaRPKPVENvalWRK(Dnp)NH2于每孔内，于37℃下置于摇床上轻摇孵育30min；于荧光酶标仪中在激发光波长320nm，发射光波长405nm下进行检测。 | ||
| 搜索关键词： | 激肽释放酶 活性检测 孵育 摇床 检测 冰箱 待测血清样品 血液 发射光波长 激发光波长 血清标志物 荧光酶标仪 诊断胰腺癌 取上清液 血液样品 液体去除 荧光底物 酶联板 吸水纸 血清 分装 平铺 稀释 洗孔 去除 桌面 保存 分配 应用 | ||
【主权项】：
1.一种标志物在血液中的活性检测方法，其特征在于，该标志物是人组织激肽释放酶7，包括如下步骤：(1) 所有收集的待测血液样品按要求于4℃冰箱静置10‑15小时后离心取上清液保存于‑80℃冰箱，检测前一天所有血清样品用1×PBS液按1：5比例进行稀释分装待测；(2) 分配96孔酶联板，向每个酶联孔内加入待测血清样品，置于摇床上轻摇孵育；(3) 向每个孔内加入klk7抗体于室温下置于摇床上轻摇孵育；(4) 去除孔内的液体，加入1×wash buffer洗孔，每次加入buffer后放置摇床5min；(5) 将吸水纸平铺于桌面，轻拍酶联板使孔内液体去除干净；(6) 加入KLK7 FRET荧光底物McaRPKPVENvalWRK(Dnp)NH2于每孔内，使其终浓度为，再于37℃下置于摇床上轻摇孵育；(7) 于荧光酶标仪中在激发光波长320nm，发射光波长405nm下进行检测，即可完成标志物在血液中的活性检测。
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