[发明专利]一种基于GQDs-CuO@3D-rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域，提供了一种基于GQDs‑CuO@3D‑rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法及应用。所制备的免疫传感器具有特异性强，灵敏度高和检出限低等优点，对乙肝标志物HBs、HBe的检测具有重要的科学意义和应用价值。

主权项

1.一种基于GQDs‑CuO@3D‑rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下几个步骤：（1）将直径为3 ~ 5mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；（2）将预处理过的电极浸入10 mL、1 mmol/L的HAuCl4溶液中，于‑0.2 V恒定电压下扫描30 s，得到电沉积金改性的电极表面，用超纯水冲洗电极表面，室温下晾干；（3）将上述步骤（2）处理过的电极浸入10mL、10 mmol/L的巯基乙酸TGA中，室温避光反应24 h后，用超纯水冲洗电极表面，室温下晾干；（4）继续将6 µL、2 ~ 4 mg/mL的GQDs‑CuO@3D‑rGO溶液滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，室温下晾干；（5）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的乙肝标志物抗体滴加到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中干燥；（6）继续将3 µL、1.0 ~ 2.0 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；滴加6 µL、0.5 ~ 120 ng/mL的一系列不同浓度的乙肝标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中干燥，制得一种基于GQDs‑CuO@3D‑rGO的乙肝标志物免疫传感器；所述GQDs‑CuO@3D‑rGO的制备，包括以下几个步骤：（1）GO的制备将300 ~ 500 mL H2SO4/H3PO4的混合酸缓慢加入到2 ~ 4 g 石墨粉和16 ~ 20 g KMnO4的混合物中，室温下搅拌混合，恒温50℃下搅拌反应10 ~ 14 h，冷却至室温，将反应液倒入350 ~ 450 mL冰中，加入2 ~ 4 mL、30%H2O2，20min后，以8000rpm转速离心分离，超纯水洗涤至中性，50℃下真空干燥，制得GO，备用；所述H2SO4/H3PO4的混合酸是将9体积的浓硫酸与1体积的磷酸混合而得；（2）GQDs的合成将200 ~ 300 mg研磨过的GO粉末分散于15 mL二甲基甲酰胺中，超声分散30 min后转移到高压反应釜内，于200℃下反应4 ~ 6 h，冷却到室温，得到棕色透明悬浮液和黑色沉淀，离心除去黑色沉淀，悬浮液透析纯化，得到GQDs的溶液；（3）GQDs‑CuO@3D‑rGO的合成将40 ~ 60 mg的GO分散到50 mL乙醇中，超声分散5 min；将0.2 ~ 0.3 g CuCl2·2 H2O溶解于10 mL超纯水中，得到CuCl2·2H2O水溶液，搅拌下逐滴加入到GO的乙醇分散液中；再逐滴加入0.5 ~ 1.5 mL的GQDs溶液，搅拌10 min后，逐滴加入0.1 ~0.3 mol/L的NH3·H2O，再搅拌10 ~ 20 min后，鼓风干燥箱中烘干，所得粉末置于微波反应器中加热3 ~ 4 h，得到GQDs‑CuO@3D‑rGO。