[发明专利]一种VEGF转染壳聚糖组织修复材料的制备方法

摘要

一种VEGF转染壳聚糖组织修复材料的制备方法，属于复合生物材料制备领域，改制备方法主要包括制备VEGF悬液、制备多巴胺修饰溶液、制备壳聚糖纳米膜、喷涂多巴胺修饰溶液、浸泡VEGF悬液。通过本方法制得的VEGF转染壳聚糖组织修复材料，进一步提高了组织修复材料的细胞粘附性及生物活性。

主权项

一种VEGF转染壳聚糖组织修复材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：将1ml LB液体培养基和20μL、10％v/v葡萄糖置于离心管中，将1mg pMal‑V2/MBP‑VEGF加入到离心管中，置于30℃，120‑260rpm/min，震荡培养过夜，得VEGF悬液；步骤二：将350mg明胶溶解于60mL水中，水浴加热到50℃搅拌至完全溶解制得明胶溶液；步骤三：将明胶溶液与150mg N‑羟基丁二酰亚胺、191mg 1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺及103mg多巴胺混合，在电热恒温水槽中40℃搅拌48小时后，将溶液置于透析袋中，放入盛有超纯水的烧杯中，并置于电热恒温水槽于40℃条件下搅拌2‑3day，且每隔8h换一次超纯水；步骤四：取出透析袋中残留的溶液，置于‑20℃冷冻箱中冷冻8h，再置于冻干机上干燥48h，得粘附性明胶；步骤五：将粘附性明胶制成3mg/ml的水溶液，用HCl和NaOH调节水溶液pH值至7，即得多巴胺修饰溶液；步骤六：称取0.2g壳聚糖，溶于40ml去离子水中，配制质量体积比为20％的壳聚糖溶液，另加入0.32g氯化钠晶体及0.5ml冰醋酸，调节pH至5.0混合搅拌均匀得壳聚糖溶液；步骤七：称取8g明胶，溶于40m1去离子水中，充分振荡后将溶液置于50℃水浴箱，待溶解后转入培养皿中，放入4℃冰箱，凝固后得固体凝胶；步骤八：将壳聚糖溶液加入固体凝胶表面，浸泡5‑7分钟，然后移出壳聚糖溶液，再加入清水浸泡1分钟，每浸泡一次壳聚糖溶液为1层，共做15层；将固体凝胶取出，放入装有37℃水的容器中，随着明胶基底逐渐熔化，其表面有薄膜析出，即得壳聚糖纳米膜；步骤九：将多巴胺修饰溶液均匀喷涂于壳聚糖纳米膜表面，并于37℃干燥箱干燥12h后，用磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗3次；步骤十：将壳聚糖纳米膜浸泡于VEGF悬液中48h得VEGF转染壳聚糖组织修复材料。