[发明专利]一种复杂生物基质中内分泌干扰物的检测方法

摘要

本发明涉及一种复杂生物基质中内分泌干扰物的检测方法，包括下述步骤，S1：加速溶剂萃取并复溶，S2：自动凝胶渗透色谱净化并复溶，S3：固相萃取并复溶，S4：采用液相色谱‑质谱联用分析仪分析溶解液Ⅲ，完成内分泌干扰物的定量检测。本发明采用加速溶剂萃取‑凝胶渗透色谱净化以及固相萃取技术建立了一生物体中多种EDCs的同时检测前处理技术，并采用液相色谱‑质谱技术建立仪器分析方法，能够有效检测复杂生物基质中内分泌干扰物的浓度，实现对生物体中内分泌干扰物的定量分析，该检测方法容易操作，具有有机溶剂用量少、对待测物的选择性高、萃取速度快、样品回收率高等优点，适用于分析含量低且结构复杂的生物体中内分泌干扰物。

主权项

1.一种复杂生物基质中内分泌干扰物的检测方法，其特征在于：包括下述步骤：S1：加速溶剂萃取并复溶：S11：加速溶剂萃取：称取待测样品，将待测样品置于冷冻干燥机中进行干燥；然后进行研磨，研磨后置于加速溶剂萃取仪萃取池中，并加入同位素内标混合物，在设定好的温度条件下，采用萃取溶剂提取待测样品，收集得到溶解有内分泌干扰物的萃取液；其中所述萃取溶剂为正己烷和丙酮，所述正己烷和丙酮的用量体积比为1：1；所述待测样品为鱼体肝脏或鱼体胆汁；S12：复溶：蒸发掉步骤S11获得的萃取液中的萃取溶剂，采用复溶溶剂Ⅰ溶解内分泌干扰物，得到溶解液Ⅰ；S2：自动凝胶渗透色谱净化并复溶：S21：自动凝胶渗透色谱净化：将溶解液Ⅰ进行自动凝胶渗透色谱净化分析，收集流出组分液；自动凝胶渗透色谱净化的参数条件为：填料为50g 200‑400目中性多孔的聚苯乙烯‑二乙烯基苯微球体(Bio‑Beads‑X3)，柱规格40cm×2cmi.d，紫外检测器检测波长240nm，流动相为体积比为1:1的乙酸乙酯/环己烷，流速5mL/min，进样量5mL，收集20～30min的流出组分液；S22：复溶：蒸发掉步骤S21获得的流出组分液中的溶剂，采用复溶溶剂Ⅱ溶解内分泌干扰物，得到溶解液Ⅱ；所述复溶溶剂Ⅱ为正己烷；S3：固相萃取并复溶：S31：活化：活化固相萃取小柱，然后将溶解液Ⅱ通过固相萃取小柱；所述固相萃取小柱的活化方法为：使用5mL甲醇、5mL丙酮和5mL的乙酸乙酯依次通过固相萃取小柱，随后用5mL体积分数0.1％的醋酸溶液通过固相萃取小柱；S32：收集洗脱液：真空干燥固相萃取小柱，然后洗脱留在固相萃取小柱上的样品，用氮吹管接收，收集到洗脱液；S33：将氮吹管置于氮吹仪上氮吹浓缩后，采用复溶溶剂Ⅲ溶解内分泌干扰物，得到溶解液Ⅲ；S4：采用液相色谱‑质谱联用仪分析溶解液Ⅲ，完成内分泌干扰物的定量检测；检测条件如下：Agilent EC‑C18柱：3.0mm×100mm，2.7μm；采用DMRM模式检测；离子喷射电压为‑4500V；干燥气温度为350℃；干燥气流速为10L/min；进样体积为5μL；流动相为0.4mL/min，体积比40％甲醇和60％水的混合物；按照上述检测条件将鱼体肝脏或胆汁中的五种内分泌干扰物BPA、NP、4‑t‑OP、4‑t‑BP、NET分离并检测出来。