[发明专利]一种复杂生物基质中内分泌干扰物的检测方法

说明书

本发明涉及一种复杂生物基质中内分泌干扰物的检测方法，包括下述步骤，S1：加速溶剂萃取并复溶，S2：自动凝胶渗透色谱净化并复溶，S3：固相萃取并复溶，S4：采用液相色谱‑质谱联用分析仪分析溶解液Ⅲ，完成内分泌干扰物的定量检测。本发明采用加速溶剂萃取‑凝胶渗透色谱净化以及固相萃取技术建立了一生物体中多种EDCs的同时检测前处理技术，并采用液相色谱‑质谱技术建立仪器分析方法，能够有效检测复杂生物基质中内分泌干扰物的浓度，实现对生物体中内分泌干扰物的定量分析，该检测方法容易操作，具有有机溶剂用量少、对待测物的选择性高、萃取速度快、样品回收率高等优点，适用于分析含量低且结构复杂的生物体中内分泌干扰物。

技术领域

本发明涉及一种复杂生物基质中内分泌干扰物的检测技术，特别是一种复杂生物基质中内分泌干扰物的检测方法。

背景技术

内分泌干扰物(Endocrine Disrupting Chemicals，EDCs)是一类可以干扰生物体或人类内分泌系统的外源性化学物质。已有的研究已发现内分泌干扰物普遍存在环境介质中，包括水、土壤和空气等各个环境介质中。内分泌干扰物会通过食物链网迁移到各个角落并沿着食物链呈现放大作用，对人类和动物构成巨大威胁。在人和动物的体液，包括血液、尿液、脐带血，甚至新生儿的体液中都广泛检测出内分泌干扰物的污染，如双酚A(BPA)、壬基酚(NP)、辛基酚(4-t-OP)和叔丁基酚(4-t-BP)等。加之，毒理学实验及流行病学调查结果表明，环境中大量存在的EDCs可能危害人类和生物体的内分泌、生殖、神经和免疫系统等的正常功能，并很可能导致生长发育异常、内分泌紊乱、婴幼儿畸形等，严重影响人类的生存与发展。因此，内分泌干扰物的问题引起了世界许多国家政府、相关学者和有关国际组织的高度重视，被视为继臭氧层破坏、温室效应之后的又一个全球性的环境问题。

因此，检测生物体中内分泌干扰物的浓度，是明确内分泌干扰物对生物体污染的前提。但是，很多生物样品，例如动物的器官，胆汁，血液等，含有很多复杂的生物基质，很难水解完全。加之，大部分EDCs比传统污染物极性更强，并且在生物中的低浓度，使得检测分析方法更加困难和复杂，无法实现对生物体中EDCs的定量分析，尤其是多组分同时分析遭遇巨大挑战。

针对复杂的生物基质，目前关于内分泌干扰物的高效快速检测方法还鲜有报道。因此，亟需提出一种容易操作，能够有效检测复杂生物基质中内分泌干扰物的浓度，实现对生物体中内分泌干扰物定量分析的快速检测方法。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种复杂生物基质中内分泌干扰物的检测方法，该检测方法采用加速溶剂萃取-凝胶渗透色谱净化、固相萃取以及液相色谱-质谱分析相结合的技术，能够有效检测复杂生物基质中内分泌干扰物的浓度，实现对生物体中内分泌干扰物的定量分析，该检测方法容易操作，具有有机溶剂用量少、对待测物的选择性高、萃取速度快、样品回收率高等优点，适用于分析含量低且结构复杂的生物体中内分泌干扰物。

本发明是这样实现的：

一种复杂生物基质中内分泌干扰物的检测方法，包括下述步骤：

S1：加速溶剂萃取并复溶：

S11：加速溶剂萃取：称取待测样品，将待测样品置于冷冻干燥机中进行干燥；然后进行研磨，研磨后置于加速溶剂萃取仪萃取池中，并加入同位素内标混合物，在设定好的温度条件下，采用萃取溶剂提取待测样品，收集得到溶解有内分泌干扰物的萃取液；

S12：复溶：蒸发掉步骤S11获得的萃取液中的萃取溶剂，采用复溶溶剂Ⅰ溶解内分泌干扰物，得到溶解液Ⅰ；

S2：自动凝胶渗透色谱净化并复溶：

S21：自动凝胶渗透色谱净化：将溶解液Ⅰ进行自动凝胶渗透色谱净化分析，收集流出组分液；

S22：复溶：蒸发掉S21获得的流出组分液中的溶剂，采用复溶溶剂Ⅱ溶解内分泌干扰物，得到溶解液Ⅱ；