[发明专利]一种制备分泌IL‑12CD19CAR‑T细胞的方法在审
| 申请号： | 201710287052.5 | 申请日： | 2017-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN106916789A | 公开（公告）日： | 2017-07-04 |
| 发明（设计）人： | 尚小云 | 申请（专利权）人： | 尚小云 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/866 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及免疫学和分子生物学T淋巴细胞技术领域，尤其涉及一种制备分泌IL‑12 CD19 CAR‑T细胞的方法。具体步骤为制备一种抗CD19嵌合抗原受体和分泌IL‑12的质粒，将这两种质粒、转座酶质粒与电转试剂混合，加入PBMC细胞中电转染，然后采用偶联CD3/CD/28抗体的磁珠富集CD3阳性T细胞，筛选并培养扩增转染后的T细胞制备分泌IL‑12 CD19 CAR‑T细胞。本发明采用第三代CAR，使用PiggyBac转座子系统电转染提高了转染效率和转基因表达效率，同时，采用人自身EF1α启动子制备抗CD19嵌合抗原受体，使CAR基因在人体内长时间持续表达；本发明所制备的T细胞还能分泌IL‑12，利于T细胞和NK细胞的活化。因此，本发明提供了一种制备效率更高、工艺相对简单、可塑性高、安全性好的分泌IL‑12的CD19 CAR‑T细胞制备方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 分泌 il 12 cd19car 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种制备分泌IL‑12CD19CAR‑T细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)PBMC细胞制备；(2)制备抗CD19嵌合抗原受体和分泌IL‑12的质粒；(3)将步骤(2)中制备的抗CD19嵌合抗原受体和分泌IL‑12质粒、转座酶质粒和Amaxa电转试剂盒中的电转试剂混合，加入PBMC细胞中进行电转染，然后采用偶联CD3/CD/28抗体的磁珠富集CD3阳性T细胞，筛选并培养扩增转染后的T细胞制备分泌IL‑12CD19CAR‑T细胞。
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