[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒灭活疫苗及其制备方法

摘要

本发明属于生物制品领域，具体涉及一种用ST细胞生产猪流行性腹泻病毒灭活疫苗及其制备方法，所述方法包括ST细胞的扩增培养；病毒接种；制苗毒液的繁殖；成品制备四个步骤。利用该方法生产得到的疫苗免疫水平高，免疫窗口期短，免疫期显著延长，肠道粘膜内总分泌型抗体(总SIgA)显著提高。

主权项

一种用ST细胞生产猪流行性腹泻病毒灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：A)ST细胞的扩增培养：取ST细胞用胰酶消化分散，加入细胞生长液在37℃、含5％CO2的环境下培养至细胞形成良好单层，再用无血清的DMEM培养液清洗细胞，用于接种猪流行性腹泻病毒；B)病毒接种：将猪流行性腹泻病毒毒种按终体积1:50～1:500接种到步骤A)制备得到的细胞中，并于35～37℃吸附30～60min后吸弃病毒液，再用细胞生长液于37℃、含5％CO2的环境下培养，至细胞病变率达75％以上时收获细胞液；C)制苗毒液的繁殖：取步骤A)中已形成良好单层的细胞系培养瓶，弃去细胞生长液，接种上述步骤B)得到的细胞液，于37～38℃继续继续培养，当细胞病变达75％以上时收获毒液，于‑15℃以下保存；D)成品制备：将步骤C)得到的毒液进行无菌检验、病毒含量测定，采用0.1％福尔马林灭活病毒得疫苗抗原液，在每1000ml灭活检验合格的疫苗抗原液中加入0.5～2份免疫增强剂，混合均匀；按96:4的重量比加入灭菌后的吐温‑80，搅拌使之溶解后，加入白油90～100份、硬脂酸铝1～3份、Span‑804份，搅拌，高压灭菌，乳化，分装，即得。