[发明专利]复合低温冻存体系冷冻雪旺细胞的方法

摘要

本发明公开了一种复合低温冻存体系冷冻雪旺细胞的方法。包括以下步骤：将氨基酸类凝胶因子加热溶于细胞培养基中，过滤、除菌，用含有凝胶因子的细胞培养基制备细胞悬浮液；在0‑4℃下向所述细胞悬浮液中滴加含有复合冷冻保护剂的细胞培养基，混合均匀；所述复合冷冻保护剂是由渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂的混合；将冻存管放入程序冻存盒在‑80℃下冷冻24h后，再将冻存管移入液氮中冻存。氨基酸类凝胶因子自组装形成的超分子凝胶具有独特的三维网状结构，在滴加冷冻保护剂时，细胞被超分子凝胶所包裹，减小了冷冻保护剂的渗透损伤；在降温和复温过程中，因为超分子凝胶的三维网状结构限制了冰晶的生长和再结晶，从而减小了冰晶损伤。

主权项

1.复合低温冻存体系冷冻雪旺细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：/n1)将氨基酸类凝胶因子加热溶于细胞培养基中，过滤、除菌，用含有凝胶因子的细胞培养基制备细胞悬浮液；/n2)在0-4℃下形成超分子凝胶；/n3)滴加含有复合冷冻保护剂的细胞培养基，待体系达到溶胀平衡；所述复合冷冻保护剂是由渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂的混合；所述的渗透性冷冻保护剂为二甲基亚砜，非渗透性冷冻保护剂为海藻糖，二者终浓度分别为7.5～8.5vol％和0.045～0.055mol/L；/n4)放入冻存管在程序冻存盒冷冻，再将冻存管移入液氮中冻存；/n其中，所述氨基酸类凝胶因子按以下方法制备而来：/n以Boc-L-酪氨酸甲酯通过烷基化反应制备得到十二烷基-Boc-L-酪氨酸甲酯；/n十二烷基-Boc-L-酪氨酸甲酯通过水解反应制备得到十二烷基-Boc-L-酪氨酸，即为所述的氨基酸类凝胶因子。/n