[发明专利]基于两性离子聚甲基丙烯基半胱氨酸修饰的表面等离子共振仪芯片的制备方法

摘要

本发明公开了一种基于两性离子聚甲基丙烯基半胱氨酸修饰的表面等离子共振仪芯片的制备方法，甲基丙烯基半胱氨酸单体通过“巯烯”点击反应获得，引发剂通过金膜表面的聚多巴胺而修饰到表面，进而通过表面引发的原子转移自由基聚合法引发单体在金膜表面聚合，从而获得一种基于两性离子聚甲基丙烯基半胱氨酸修饰的表面等离子共振仪芯片，芯片对单一蛋白溶液及天然复杂样品体系中均具有很强的抗污染性能，并且对生物大分子如抗体具有高固载量和良好的相容性，可实现复杂蛋白体系中目标分子的高灵敏、无标记快速检测；具有很强的抗污染性能，高稳定性和高固载量等优点，有很好的可行性和实用性。

主权项

1.一种基于两性离子聚甲基丙烯基半胱氨酸修饰的表面等离子共振仪芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a)裸金芯片制备采用电子束蒸发镀膜技术在基底上涂覆一层2‑3nm厚的铬层，在该铬层上涂覆一层45‑50nm厚的金膜，得到裸金芯片；b)裸金芯片预处理将步骤a)获得的裸金芯片浸入食人鱼洗液中，常温下浸泡1‑3h，取出用去离子水清洗3次后用氮气吹干；c)两性离子甲基丙烯基半胱氨酸单体的合成将24.98mmol半胱氨酸用20mL去离子水溶解后，向其中加入27.47mmol 2‑丙烯酸‑2‑羟基‑1,3‑丙二酯以及29.4μmol二甲苯基磷，于20‑30℃下搅拌反应2‑4h，反应后的溶液用乙酸乙酯萃取一次，二氯甲烷萃取两次，冻干后得到白色粉末状的两性离子甲基丙烯基半胱氨酸单体；d)裸金芯片表面多巴胺聚合用pH＝8.5的三羟甲基氨基甲烷缓冲液配制1‑3mg/mL多巴胺溶液，将b)步骤得到的裸金芯片浸入其中，于40‑60℃下孵育1‑2h，取出用去离子水清洗3次后用氮气吹干；e)聚多巴胺芯片表面溴代异丁酰溴引发剂修饰将d)步骤得到的芯片的基底浸入20ml含有1.0ml三乙胺的二氯甲烷中，在冰浴且搅拌条件下逐滴加入10ml含有0.9ml溴代异丁酰溴的二氯甲烷，室温下搅拌反应12‑24h，取出用乙醇和去离子水依次清洗3次后用氮气吹干；f)裸金芯片表面聚甲基丙烯基半胱氨酸合成将e)步骤得到的芯片放入预先三次循环脱气并充氮气的施伦克瓶中；将c)步骤得到的5mmol单体溶解于4ml去离子水中，用氮气脱气10‑30min，向其中加入0.5mmol联吡啶、0.167mmol溴化亚铜和0.083mmol溴化铜，用氮气脱气10‑30min后用超声处理5‑10min，将得到的溶液移入施伦克瓶，使得溶液将瓶中的芯片浸没，于氮气条件下反应2‑4h后取出芯片，用乙醇和去离子水依次清洗3次后用氮气吹干。