[发明专利]一步式免标记荧光快速检测汞离子的方法

摘要

本发明公开了一步式免标记荧光快速检测汞离子的方法，基于ssDNA可与Hg2+形成稳定的T‑Hg2+‑T复合物，并可折叠成稳定的发卡结构双链DNA(dsDNA)的原理，利用荧光染料SG I可以嵌入dsDNA双螺旋结构的小沟结构区域中，可被激发出较强的荧光，且荧光强度与Hg2+的浓度呈正相关，实现了对Hg2+的快速检测。对水样中Hg2+的最低检出限为3nM，低于美国环境保护署标准，而且特异性强，不受其它金属离子干扰，重复性好，本发明的检测方法成本较低、操作简单，易通过新型检测平台在现场Hg2+检测方面推广应用，实现自动化，在重金属的应急处置、环境监测、风险评估和管理等方面具有很大的潜力。

主权项

一步式免标记荧光快速检测汞离子的方法，其特征是包括如下步骤：(1)在6‑8支离心管中加入200μL 100nM汞特异性ssDNA溶液和2μL 100×用水稀释的SYBR Green I荧光染料，再分别加入50μL浓度呈梯度的选自5‑1000nM的6‑8个Hg2+水溶液，混匀，室温下孵育0.5‑3min；(2)采用荧光分光光度计，以490nm为激发波长，在535nm的发射波长下分别对步骤(1)获得的液体进行扫描，获得各自的荧光强度值，制备荧光强度响应标准曲线；(3)重新取3‑5支离心管，加入200μL 100nM汞特异性ssDNA溶液和2μL 100×用水稀释的SYBR Green I荧光染料，再加入经0.45μm微孔滤膜过滤的50μL待测水样，混匀，室温下孵育0.5‑3min；采用荧光分光光度计，以490nm为激发波长，在535nm的发射波长下对待测水样进行扫描，获得荧光强度值，与荧光强度响应标准曲线比对，得到待测水样的Hg2+浓度，所述ssDNA的核苷酸序列用SEQ ID NO.1所示；所述ssDNA溶液的溶剂的配方为：4‑羟乙基哌嗪乙磺酸:10mM,NaNO3:20mM,pH:7.6，余量为水。