[发明专利]一种乙酰谷酰胺代谢产物鉴定检测方法

摘要

本发明公开了一种乙酰谷酰胺代谢产物鉴定检测方法：(1)取谷红注射液体尾静脉注射SD大鼠，5min～8h分时间点静脉采血，离心分离血浆；(2)血浆中加乙腈，血浆与乙腈体积比1：3～3.5，混匀后离心，取上清为样品待测；(3)测定方法：采用四极杆‑线性离子阱型串联质谱仪对样品进行梯度洗脱分离，结合MIM‑IDA和Q3MI‑IDA扫描方法，通过LightSight®软件，在一针进样中同时完成乙酰谷酰胺代谢产物鉴定检测方法。发现通过MIM‑IDA‑EPI采集模式检测到3种乙酰谷酰胺在体内的可能代谢产物（乙酰谷氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸）。乙酰谷酰胺标准品和血浆样品中均可发现保留时间不同的3个异构体峰，其二级谱图一致。未发现γ‑氨基丁酸，推测可能是因为组织分布不同，γ‑氨基丁酸更多的存在于神经系统中。此方法灵敏度高、可靠、快速，该方法的建立为今后同类药物的定性定量分析提供基础。

主权项

1.一种乙酰谷酰胺代谢产物鉴定检测方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)谷红注射液尾静脉注射SD大鼠，注射量为8～15 mg/kg；5min～8h分时间点静脉采血，血样置肝素化离心管中，离心分离血浆；/n(2) 血样处理方法：微量加样器吸取血浆，加乙腈，血浆与乙腈体积比1：3～3.5，旋涡混匀，离心，取上清作为样品待测；/n(3) 采用高效液相色谱-三重四极杆线性离子阱串联质谱对样品进行检测分析，仪器条件如下：/na、色谱条件：Shimadzu 20ADXR；/n柱温：40～60ºC；/n流速：0.5～1.0 mL/min；/n流动相A：水，5mM乙酸铵, pH 6.2；/n流动相B：乙腈；/n色谱柱及洗脱方式：BEH amide柱，梯度洗脱：水相5%-60%；/nb、质谱条件：AB SCIEX Qtrap 4500；/n扫描模式Scan Mode：ESI Negative Mode；/n气帘气CUR：25 psi；/n喷雾电压IS：5500 V；/n离子源温度TEM：500～650 ℃；/n雾化气GS1：60 psi；/n加热气GS2：60 psi；/n碰撞气CAD：Medium；/n按以下方法操作：梯度洗脱条件：0～1min，流动相A的体积分数为5%；1～5min，流动相A的体积分数从5%增加为10%；5～10min，流动相A的体积分数从10%增加到60%；10～12min，流动相A的体积分数为60%，12～12.1min，流动相A的体积分数从60%减少到5%，12.1min之后，流动相A的体积分数保持5%；梯度洗脱中，流动相A和流动相B的体积分数之和为100%；/n(4) 根据乙酰谷酰胺代谢特点，质谱采用MIM-IDA和Q3MI-IDA方法检测，Multiple IonMonitoring (MIM)为预扫描模式，采用MIM-IDA-EPI的工作流程；此模式采用Q3和Q1设置为相同质荷比的MRM方法，实验中检测101对离子对；质量范围为100.1Da-200.1 Da，该模式下不需要预测可能的生物转化过程；为避免母离子在Q2碰撞池碎裂，将CE设置为5V；每对离子对驻留和停顿时间设为1毫秒，一个扫描周期需要0.8秒；QTRAP® 系统结合LightSight®软件进行代谢物鉴定。/n