[发明专利]一种同步分离高纯度植物叶绿体和线粒体的方法有效
| 申请号： | 201710164468.8 | 申请日： | 2017-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN106947729B | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 华玮;李俊;范世航;刘红芳 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院油料作物研究所 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430062 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种同步分离高纯度植物叶绿体和线粒体的方法，其步骤是：A.叶片组织加入CIB缓冲液，研磨后依次通过70μm、35μm和15μm滤网过滤，过滤液200×g离心5min，去除组织残渣、细胞碎片；B.将上述滤液1000×g离心10min，收集富含叶绿体的沉淀；C.收集步骤B离心后的上清液，5μm滤网过滤，过滤液经2000×g离心10min，弃沉淀，上清液17000×g离心10min，收集富含线粒体沉淀；D.上述沉淀分别用洗涤缓冲液洗涤，并用DNase I消化以去除背景基因组的污染；E.叶绿体沉淀1000×g离心10 min后弃上清，线粒体沉淀17000×g离心10 min后弃上清，沉淀用洗涤缓冲液洗涤。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 同步 分离 纯度 植物 叶绿体 线粒体 方法 | ||
【主权项】：
1.一种同步分离高纯度植物叶绿体和线粒体的方法，其步骤是：A. 植物叶片组织冲洗干净并剪碎，按照叶片组织的质量与CIB缓冲液的体积比m: v为1: 15加入CIB缓冲液，研磨后依次通过70 μm、35 μm和15 μm滤网过滤，过滤液200×g离心5 min，去除组织残渣、细胞碎片；B. 根据叶绿体和线粒体不同的沉降系数，将步骤A获得的滤液1000×g离心10 min，收集富含叶绿体的沉淀；C. 收集步骤B离心后的上清液，用5 μm的滤网过滤，过滤液经2000 ×g离心10min，弃沉淀，上清液17000 ×g离心10 min，收集富含线粒体沉淀；D. 收集得到的叶绿体和线粒体沉淀分别用洗涤缓冲液洗涤，并用DNase I消化以去除核基因组的污染；E. 叶绿体沉淀的消化液1000×g离心10 min之后弃上清，沉淀用洗涤缓冲液洗涤，得到的即为叶绿体；线粒体沉淀的消化液17000×g离心10 min之后弃上清，沉淀用洗涤缓冲液洗涤，得到的即为线粒体。
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