[发明专利]一种针对兴安天门冬的组培快繁方法

摘要

本发明提供了一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，该技术方案包括取材与外植体消毒、腋芽诱导培养、根丛诱导培养、根丛增殖培养、生根预分化培养、生根培养以及组培苗移栽等过程。本发明采用根丛繁殖途径，有别于常规的单茎繁殖生根或愈伤途径；以根丛作为目标繁殖单位，以及后续诱导生根部位，促进生根，提高组培苗的繁殖系数与整齐度。同时，本发明采用蔗糖浓度由低到高的两段生根法促进生根，并重点添加适当浓度的嘧啶醇促进根的发育，有效解决了兴安天门冬生根困难问题，整个周期8～12月，生根率超过60％，在诱导率、生根率、根的质量、移栽成活率等方面达到植物组培快繁要求，为兴安天门冬保存与利用奠定了基础。

主权项

1.一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：1)取兴安天门冬嫩茎作为外植体，清洗消毒，切成每个带有1～2个腋芽的茎段；2)腋芽诱导培养；用于腋芽诱导培养的腋芽诱导培养基，其成分为：MS培养基，L‑谷氨酰胺0.2g/L，6‑BA0.2mg/L，激动素0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，嘧啶醇0.1mg/L，3％蔗糖，琼脂0.8％；所述腋芽诱导培养基的pH为5.8；3)根丛诱导培养：取步骤2)培养后的茎段，取其上长出的、超过5cm的茎，切去茎尖，平铺接种于根丛诱导培养基S2上，无菌培养20～30天，而后切除此期间长出的新生茎的茎尖，重新平铺接种于新的根丛诱导培养基S2上，继代培养1～2周期，直至每个叶腋处长出3～8个成簇的嫩茎，得到母体茎段，每个成簇的嫩茎群基部是后续诱导生根部位，即为根丛；4)根丛增殖培养：取步骤3)所得的母体茎段，分割出若干株高为2～3cm的根丛，接种到根丛增殖培养基SA上，无菌培养20～30天，取出根丛，分割成2～4个小根丛，接种于新的根丛增殖培养基SA上，继代培养1～2周期；5)生根预分化培养：取步骤4)培养后的小根丛，修剪至株高2～3cm，接种至生根预分化培养基RM5‑1中，无菌培养20～30天，而后继代培养1～2周期；6)生根培养：取步骤5)预分化培养后的小根丛，分割成若干株高为2～3cm的、每个带3～5个茎的子根丛，接种于生根培养基RM5‑2中，无菌培养20～30天，继代培养1～2周期，直至60％以上子根丛基部长出3～5条肉质根；其中，所述根丛诱导培养基S2的成分为：MS培养基，L‑谷氨酰胺0.2g/L，6‑BA 0.1mg/L，激动素0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，嘧啶醇0.1mg/L，蔗糖3％，琼脂0.8％；所述根丛诱导培养基S2的pH为5.8；所述根丛增殖培养基SA的成分为：MS培养基，L‑谷氨酰胺0.2g/L，激动素0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，嘧啶醇0.2mg/L，蔗糖3％，琼脂0.8％；所述根丛增殖培养基SA的pH为5.8；所述生根预分化培养基RM5‑1的成分为：MS培养基，L‑谷氨酰胺0.2g/L，萘乙酸0.2mg/L，嘧啶醇1mg/L，蔗糖3％，琼脂0.8％；所述生根预分化培养基RM5‑1的pH为5.8；所述生根培养基RM5‑2的成分为：MS培养基，L‑谷氨酰胺0.2g/L，萘乙酸0.2mg/L，嘧啶醇1.3mg/L，蔗糖6％，琼脂0.8％；所述生根培养基RM5‑2的pH为5.8。