[发明专利]一种针对兴安天门冬的组培快繁方法

说明书

本发明提供了一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，该技术方案包括取材与外植体消毒、腋芽诱导培养、根丛诱导培养、根丛增殖培养、生根预分化培养、生根培养以及组培苗移栽等过程。本发明采用根丛繁殖途径，有别于常规的单茎繁殖生根或愈伤途径；以根丛作为目标繁殖单位，以及后续诱导生根部位，促进生根，提高组培苗的繁殖系数与整齐度。同时，本发明采用蔗糖浓度由低到高的两段生根法促进生根，并重点添加适当浓度的嘧啶醇促进根的发育，有效解决了兴安天门冬生根困难问题，整个周期8～12月，生根率超过60％，在诱导率、生根率、根的质量、移栽成活率等方面达到植物组培快繁要求，为兴安天门冬保存与利用奠定了基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，进一步涉及植物的组织培养和快速繁殖技术，具体涉及一种针对兴安天门冬的组培快繁方法。

背景技术

兴安天门冬(Asparagus dauricus Fisch.ex Link)，属百合科天门冬属多年生草本植物。研究发现，它雌雄异株，矮生性，嫩茎抽生多，高抗芦笋茎枯病，具有很多芦笋栽培种所亟需的优异性状，是芦笋重要的近缘种质。由于兴安天门冬种子萌发性差，通过分蔸法繁殖效率低，为了更好开发兴安天门冬，利用其优异性状改良芦笋，很有必要建立兴安天门冬组织培养快繁体系。

目前国内外均未见兴安天门冬组织培养和快繁技术研究的报道。但在天门冬属内，芦笋(Asparagus officinalis L.)研究最为深入，现已建立了成熟的组培快繁体系。此外，羊齿天门冬、Asparagus racemosus等近缘种组织培养也先后取得成功。这些天门冬属种组织培养和快繁技术研究主要都是基于MS培养基中的不同细胞分裂素和细胞生长素等植物激素的浓度及配比。研究发现，天门冬属种质组培快繁最大障碍是生根困难，不同种激素浓度及配比差异很大，不同芦笋品种、雄株和雌株激素浓度及配比也有区别。实践中发现，兴安天门冬组培苗生根相当困难，易玻璃化和产生愈伤。

发明内容

本发明旨在针对现有技术缺陷，提供一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，以解决现有技术中在组织培养条件下兴安天门冬生长情况较差的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是现有技术中组织培养条件下兴安天门冬生根困难。

本发明要解决的再一技术问题是现有技术中组织培养条件下兴安天门冬繁殖系数和移栽成活率较低。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，包括以下步骤：

1)取兴安天门冬嫩茎作为外植体，清洗消毒，切成每个带有1～2腋芽的茎段；

2)腋芽诱导培养；

3)根丛诱导培养：取步骤2)培养后的茎段，取其上长出的、超过5cm的茎，切去茎尖，平铺接种于根丛诱导培养S2上，无菌培养20～30天，而后切除此期间长出的新生茎的茎尖，重新平铺接种于新的根丛诱导培养S2上，继代培养1～2周期，直至每个叶腋处长出3～8个成簇的嫩茎，得到母体茎段，每个成簇的嫩茎群基部即为根丛；

4)根丛增殖培养：取步骤3)所得的母体茎段，分割出若干株高为2～3cm的根丛，接种到增殖培养基SA上，无菌培养20～30天，取出根丛，分割成2～4个小根丛，接种于新的增殖培养基SA上，继代培养1～2周期；

5)生根预分化培养：取步骤4)培养后的小根丛，修剪至株高2～3cm，接种至生根预分化培养基RM5-1中，无菌培养20～30天，而后继代培养1～2周期；

6)生根培养：取步骤5)预分化培养后的小根丛，分割成若干株高为2～3cm的、每个带3～5个茎的子根丛，接种于生根培养基RM5-2中，无菌培养20～30天，继代培养1～2周期，直至60％以上子根丛基部长出3～5条肉质根；