[发明专利]一种减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的pBpp重组蛋白表达菌株及其功能验证方法

摘要

本发明提供了一种减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的pBpp重组蛋白表达菌株及其功能验证方法，该技术方案以斑马鱼粪便菌群DNA为模板，扩增得到pBpp表达基因，再利用Abvec质粒为载体，先于大肠杆菌TOP10中扩增质粒，而后采用电击转化的方式导入鼠伤寒沙门氏菌VNP20009株。该技术方案依托于减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009胞内侵袭的特性，可携带pBpp蛋白靶向作用于胰岛β细胞，在保证pBpp蛋白高效表达的基础上提升其血糖调节作用。实验发现，本发明所提供的pBpp重组蛋白表达菌株可确切诱导胰腺中β细胞的增殖，从而对因胰岛β细胞损伤所导致的糖尿病起到治疗效果。

主权项

一种减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的pBpp重组蛋白表达菌株，其特征在于该菌株是由以下方法制备的：1)以斑马鱼粪便菌群的总DNA为模板，以序列如SEQ ID No.1所示和序列如SEQ ID No.2所示的片段分别为上、下游引物执行PCR扩增，得到序列如SEQ ID No.3所示的DNA片段，即为pBpp蛋白表达基因；2)取步骤1)所获得的pBpp蛋白表达基因，连接到Abvec载体上，即得到重组质粒Abvec‑pBpp；3)取步骤2)所得的重组质粒Abvec‑pBpp，转入大肠杆菌E.coli Top10中，得到重组菌株；4)培养步骤3)所得的重组菌株，从中提取重组质粒Abvec‑pBpp，将其通过电转法导入感受态的减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009中，通过氨苄青霉素抗性筛选出阳性克隆，得到重组表达菌株Abvec‑pBpp‑VNP20009，即为所述减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的pBpp重组蛋白表达菌株。