[发明专利]一种浮游植物细胞内外活性氧的检测方法

摘要

本发明公开了一种浮游植物细胞内外活性氧的检测方法，本发明中的CDs荧光信号稳定、尺寸小，较其他的荧光量子点具有水溶性好和生物毒性低等优势，不仅能够克服同位素示踪、电子自旋共振，色谱分析等技术的缺陷，且具检测线性范围广、精密度高、检测限低等优势。

主权项

1.一种浮游植物细胞内外活性氧的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）取近海典型浮游植物于f/2培养基中进行培养，该f/2培养基中含有用以标记近海典型浮游植物的SA‑CDs，获得SA‑CDs标记培养液，具体培养条件如下：f/2培养基中含有14~16 mg/L CDs，置于光照强度为130~150μmol photons （m² s）^‑1，光暗比为12~15 h:8~10 h，温度为18~20℃ 生化培养箱中培养，以80~120 rpm搅拌海藻悬浮液模拟海水流动，同时减少CDs在容器壁上吸附；上述SA‑CDs为水杨酸表面修饰的碳量子点；（2）以H₂O₂溶液作为活性氧标准液，根据上述SA‑CDs在不同浓度的活性氧标准液的荧光强度变化的情况，获得第一线性工作曲线：y=0.2599x+2.404，其线性范围 6‑150 ng/L，其中x表示H₂O₂浓度，y表示荧光强度；根据上述SA‑CDs在不同浓度的活性氧标准液的显色吸光度变化情况，获得第二线性工作曲线：y=‑0.0002x+0.1941，其线性范围为3‑400ng/L ，其中x表示H₂O₂浓度，y表示吸光强度；（3）步骤（1）获得的SA‑CDs标记培养液中的藻细胞悬浮于适量海水中，于17~19℃同时在高压汞灯持续照射下，以80~100rpm的速度持续搅拌0.8~1.2h，然后取适量进行超声波破碎，得破碎液，在破碎液中加入适量FeCl₃溶液后于激发波长343 nm，发射波长440 nm下扫描其荧光光谱Slit 2.5/5，记录试剂空白和试液的荧光强度F₀和F₁，计算荧光强度变化值△F= F₀‑F₁，最后将该荧光强度变化值△F作为y代入步骤（2）所得的第一线性工作曲线，所得x即为藻细胞内活性氧浓度检测结果；（4）步骤（1）获得的SA‑CDs标记培养液中的藻细胞悬浮于适量海水中，于17~19℃同时在高压汞灯持续照射下，以80~100rpm的速度持续搅拌0.8~1.2h，得细胞悬浮液，在该细胞悬浮液中加入适量FeCl₃溶液后于波长λ525nm检测吸光强度，最后将该吸光强度作为y代入步骤（2）所得的第二线性工作曲线，所得x即为藻细胞外活性氧浓度检测结果。