[发明专利]一种人类精子顶体反应能力检测的方法

摘要

本发明公开了一种人类精子顶体反应能力检测的方法，特点是步骤为①取适量液化的精液，缓缓加入到37℃上游液底部，优选精子；②将优选出来的精子悬液分成两份于流式上样管中，检测管加顶体反应诱导剂，对照管加入顶体反应诱导剂溶剂；③诱导顶体反应结束后，离心去上清，加入预冷乙醇固定，固定结束后，离心去上清；④加入缓冲液重悬精子，再加入FITC‑PSA染色液；⑤设定流式细胞仪的校准，对照管检测管按顺序上机，每管样本至少连续测定两次；⑦测定后，分别用漂白剂、进样管清洁剂和除菌的双蒸水彻底清除残留于流式细胞仪进样线中的细胞碎片和荧光染料，优点是操作简单且方便快速、结果易于判定、检测结果准确、稳定可靠、重复性好。

主权项

一种人类精子顶体反应能力检测的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取500μL液化的精液，从含有37℃预热的600μL上游液的样本管底部缓缓加入，用上游法优选精子15min；(2)上游结束后吸取400μL优化好的精子悬液，分成两份于流式上样管中，每管200μL，检测管加入10μL顶体反应诱导剂，对照管加入10μL顶体反应诱导剂溶剂，37℃避光诱导15min；(3)诱导顶体反应结束后，7000r/min离心2min，去上清后，加入200μL预冷的70wt％乙醇水溶液振荡混匀，室温固定2min，再以7000r/min离心2min，去上清；(4)两管中各加500μL缓冲液，振荡混匀重悬精子，再加入5μL的FITC‑PSA染液，37℃避光染色15min；(5)设定流式细胞仪的校准，对照管、检测管按顺序上机，每管样本至少连续测定两次，每管样本至少记录样本主群5000个细胞并使用AR计算软件统计分析；(6)依据软件计算出的结果，顶体反应发生率即为通过Ca2+载体诱导产生的发生顶体反应的精子群百分比减去在自然状态下自发进行的顶体反应精子群百分比，获得的百分比差值大于15％即为正常人群数值，低于15％的则可能为异常人群；(7)测定后，分别用漂白剂、进样管清洁剂和除菌的双蒸水彻底清除残留于流式细胞仪进样线中的细胞碎片和荧光染料。