[发明专利]基于高通量测序的PCR产物大样本量混合建库的文库构建方法和试剂有效
| 申请号： | 201710107944.2 | 申请日： | 2017-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN108504651B | 公开（公告）日： | 2020-09-08 |
| 发明（设计）人： | 陈建国;陈川;张静;王瑢;杨传春;张文勇 | 申请（专利权）人： | 深圳乐土生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市大*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于高通量测序的PCR产物大样本量混合建库的文库构建方法和试剂。方法包括：将来源于不同样本DNA的多个PCR产物中的每一个，分别与带有标签序列的随机引物进行退火，并在恒温扩增酶的作用下进行恒温扩增反应；将不同样本来源的恒温扩增产物混合，并对混合产物进行片段选择；对片段选择的产物进行5’磷酸化平末端修复和3’末端加A反应；与接头序列连接，以得到能够区分文库信息的连接产物；对连接产物进行PCR扩增，以得到适用于高通量测序的上机文库。本发明不依赖于超声打断仪器；实现混合建库，降低建库成本及复杂度；减少数据浪费，提高测序数据的碱基随机性、覆盖深度均一性，从而降低单个样本的测序成本。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 通量 pcr 产物 样本 混合 文库 构建 方法 试剂 | ||
【主权项】：
1.一种基于高通量测序的PCR产物大样本量混合建库的文库构建方法，其特征在于，包括：(1)将来源于不同样本DNA的多个PCR产物中的每一个，分别与带有标签序列的随机引物进行退火，并在恒温扩增酶的作用下进行恒温扩增反应，得到能够区分样本来源的恒温扩增产物，其中所述带有标签序列的随机引物的序列结构如下：X(m)N(n)，其中X(m)表示标签序列，其长度为4～15个碱基，用于区分样本来源；N(n)表示随机碱基序列，其长度为6～10个碱基，用于与所述PCR产物随机结合；(2)将不同样本来源的恒温扩增产物混合，并对混合产物进行片段选择；(3)对所述片段选择的产物进行5’磷酸化平末端修复和3’末端加A反应，以得到具有5’磷酸化和3’粘性末端A的DNA片段；(4)将所述DNA片段与接头序列连接，以得到能够区分文库信息的连接产物，其中所述接头序列含有用于区分文库的条形码序列；(5)对所述连接产物进行PCR扩增，以得到适用于高通量测序的上机文库。
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