[发明专利]一种牡丹离体再生组培方法

摘要

一种牡丹离体再生组培方法，先将牡丹种子灭菌后取其成熟胚，接种在1/2MS培养基上培养；待成熟胚萌发后取其幼嫩的下胚轴，接种在改良MS培养基上培养15‑25天，至下胚轴切口处膨大；再将切口处膨大的下胚轴继代在改良MS培养基上接种14‑30天，至下胚轴膨大的切口处直接分化出牡丹不定芽；待牡丹不定芽长至3‑4cm时，将牡丹不定芽从根部切下，并接种在改良MS培养基上生根，即完成牡丹离体再生。本发明提供的一种牡丹离体再生组培方法，在PEG6000渗透胁迫突然解除及Ca2+和微量元素Mn2+、Zn2+、Mo6+和Cu2+的浓度增加的情况下，下胚轴可不经过愈伤组织而直接产生不定芽，略过了愈伤组织这一过程，解决了愈伤组织分化不定芽却比较困难、不定芽分化率一般比较低的问题。

主权项

1.一种牡丹离体再生组培方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将牡丹种子灭菌后取其成熟胚，接种在1/2MS培养基上培养；步骤二、待成熟胚萌发后取其幼嫩的下胚轴，剪切成0.4‑0.6cm长，接种在含有4%(W/V)的PEG6000并附加了1.5 ‑ 2.5 mg/L 6‑BA、0.2 ‑ 0.5 mg/L IBA和3%(W/V)蔗糖的改良MS培养基上培养15‑25天，至下胚轴切口处膨大；步骤三、将切口处膨大的下胚轴继代在附加了1.5 ‑ 2.5 mg/L 6‑BA和0.2 ‑ 0.5 mg/L IBA的改良MS培养基上接种14‑30天，至下胚轴膨大的切口处直接分化出牡丹不定芽；步骤四、待牡丹不定芽长至3‑4cm时，将牡丹不定芽从根部切下，并接种在附加了0.2 mg/LNAA、0.2 mg/L IBA、50‑100mg/L脯氨酸和0.1‑3mg/L核黄素的改良MS培养基上生根，即完成牡丹离体再生；其中，步骤二、步骤三和步骤四中采用的改良MS培养基的配方为：Ca2+浓度是MS培养基中Ca2+浓度的两倍， Mn2+、Zn2+、Mo6+和Cu 2+的浓度分别为MS培养基中Mn2+、Zn2+、Mo6+和Cu 2+浓度的1‑12倍。