[发明专利]一种洋金花药材的鉴别方法

摘要

本发明涉及一种洋金花药材的鉴别方法，该方法以细胞内动态质量再分布现象作为检测原理，以共振波导光栅传感器为检测手段，按照二相表型药理法，满足(1,0)表型的药材即为洋金花，其他表型的药材为伪品。本发明提供的方法通量高、专属性强、表型易于观察、与高效液相色谱法兼容性高，可以在药效水平上辨识洋金花及其混伪品，对控制药材质量从而确保其临床用药的有效性和安全性具有重要意义。

主权项

一种洋金花药材的鉴别方法，其特征是：包括：基于共振波导光栅传感器的二相表型药理鉴别法，(1)药材的提取精密称定1g药材粉末，置锥形瓶中，加入10mL浓度为2mol/L的盐酸溶液，超声处理，功率250W，频率40kHz，30分钟，放冷，滤过，滤渣和滤器用10mL上述盐酸溶液分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH值至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次10mL，合并三氯甲烷，回收溶剂至干，残渣用缓冲液溶解，转移至5mL量瓶中，加缓冲液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液用于测试；(2)用共振波导光栅传感器检测药材提取液刺激CHO‑M2细胞所产生的药理表型取20μL CHO‑M2细胞悬液接种在细胞测试板中，放入含有5％二氧化碳、温度为37℃的培养箱中培养14小时，取出细胞测试板，移除培养基，用移液枪向每个孔中加入20μL Hank's平衡盐溶液，将测试板放入Corning Epic BT系统进行信号平衡，1小时后，将基线归零并启动一个新的信号记录程序，记录2分钟后，暂停程序，用排枪将10μL提取液加入每个微孔中，并继续记录1小时；如果加入药材提取液后检测信号超过100pm，则该表型记为1；若信号在‑100到100之间，则该表型记为0；若信号小于‑100，则该表型记为‑1；药材提取液在该阶段所产生的动态质量再分布信号即为第一相表型；(3)用共振波导光栅传感器检测乙酰胆碱和药材提取液共同刺激CHO‑M2细胞所产生的整合药理表型在上述记录程序结束后，重新开始一个程序；信号记录2分钟后暂停程序，用排枪向每个孔中加入10μL浓度为16μM的乙酰胆碱Hank's平衡盐溶液，然后继续记录程序1小时，如果加入乙酰胆碱溶液后信号超过100pm，则该表型记为1；若信号在‑100到100之间，则该表型记为0；若信号小于‑100，则该表型记为‑1；该阶段产生的动态质量再分布信号即为第二相表型；(4)整合第(2)、(3)步的表型，并与洋金花药材表型进行比对如果满足(1, 0)则为洋金花，其中“ 1”为步骤(2)的表型，“ 0”为步骤(3)的表型，否则，即为伪品药材；(5)基于共振波导光栅传感器的二相表型药理鉴别法与HPLC的联合用于鉴定洋金花药材质量按照如下条件对洋金花进行HPLC分析，将成分的峰面积或含量与药材活性值进行关联；流动相A：含有0.0025mol/L庚烷磺酸钠的水溶液，用磷酸调至pH＝5；流动相B：乙腈；分离条件为(以B％表示)：0‑13min，16‑16％；13‑20min，16‑18％；20‑28min，18‑18％；28‑30min，18‑20％；30‑42min，20‑20％；42‑60min，20‑25％；流速为1.0mL/min；检测波长为215nm。